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问
NF-kB的激活验证
balalaLy
核浆分离提取蛋白,比较核内外蛋白量,提取总蛋白比较磷酸化和非磷酸化
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问
NF-kB活化的验证
汤姆卜丽波
我们测的都是核内,还是核内稳妥一点
3 回答
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问
为什么我的样品,头一天还可以在显微镜下观察到荧光,第二天就一点也看不到了
whilt-shirt
这是荧光猝灭了,在加完荧光试剂后要加荧光抗猝灭剂
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问
请教兔样品做wb选择抗体问题,感谢!
bamboopiggy
用兔做wb的确实少,但是要记得你有对照组,如果实在找不到合适的鼠源的抗体,可以用兔源的。但是如果reactivity里没有写兔,确实有风险,但是不试,也不知道会不会有反应。你可以考虑找公司要试用装,现在国内的抗体公司可以申请试用装。
4 回答
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问
wb LC3怎么跑才好看啊,我每次跑的都很丑,感觉很弥散,不清晰。
bamboopiggy
用15%的胶,不要跑的太低,大概留住10的marker,就转膜。
4 回答
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问
膜蛋白的提取效率低,而且检测到大多数为阶段后的蛋白
汤姆卜丽波
以下是提膜蛋白的protocol, 有些注意要点,是不是没有注意到, 1.将离心管柱及接收管套管放置冰上预冷。 2.细胞样品,贴壁细胞样品建议使用细胞刮刀收集,尽量不使用胰酶消化,细胞量为 20-50 X 106 个细胞。 3a.用预冷的 PBS 清洗一次细胞。Buffer A 中重悬细胞(起始细胞数小于 5X 106 加入 200ul Buffer A,起始细胞数大于 5X 106 加入
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问
配SDS-PAGE胶时 ,用无水乙醇封,残余的无水乙醇会对胶有影响吗?
whilt-shirt
会导致上层胶与下层胶之间出现气泡,并且胶不匀
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问
BCA测蛋白浓度时,我的样品比标准品晚了几分钟加,会有什么影响吗
天一湖医者
这个一般来说是不会有什么影响的。
4 回答
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问
WB显影时,marker也一起被显出强光是什么原因呢,怎么避免?
天一湖医者
可能有以下原因:一抗是单克隆吗?如果不是,那么多克隆抗体时会产生你说的那样的结果的!
5 回答
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问
WB内参两条带?换内参吗?
秋秋欣欣
可能是胶配得有问题也有可能是样品的问题
8 回答
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问
想请教WB半干转的电流和时间怎么选择
bamboopiggy
你用的什么公司的机器?公司应该给说明书了,按照说明书来调就好。大分子量的,就时间稍微长一点,小分子量的,时间可以稍微短一点。
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问
老师这个蛋白打下去时候就成团,不好看,什么原因啊
balalaLy
图片看不清。成团的话,可能是loading buffer太粘稠,或者是蛋白液中杂质比如核酸没有去除干净。
4 回答
192 围观
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问
各位老师我想问一下WB电流大小是与膜的面积有关吗? 这怎么算膜的大小面积?然后用多少ma电流啊?
bamboopiggy
你是说转膜的电流吧?这个和你的机器有关系,和你膜的面积的大小关系不大,你买的是湿转的,还是半干转的?问买的业务员,可以用多大电流。
3 回答
378 围观
3 回答
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问
想请教一下各位大佬,胶倾斜是什么原因呀?
bamboopiggy
你灌的不匀,所以积层胶和分离胶之间没有压住
5 回答
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问
如何证明三个蛋白能形成三聚体?
bamboopiggy
首先用co-ip,a能拉下b和c来,b能拉下a和c来,c能拉下ab来,然后跑native 胶,三聚体的大小应该是三个蛋白分子量的总和。
3 回答
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问
用于酵母双杂交转化的质粒质量要比较高吗?
天一湖医者
是的,用于酵母双杂交转化的质粒质量要比较高。
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问
菌液OD值和浓度有线性关系么?
bamboopiggy
在一定范围内,有线性关系。OD600基本就是看菌的浑浊的,来决定能不能进行下一步实验。很少有人看这个线性关系。
5 回答
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问
WB跑胶条带跑不开是什么原因呢?
whilt-shirt
有可能是胶的原因,建议选择相应浓度的分离胶
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问
图示为70分子量的marker位置 膜上有但没有显影,目标蛋白分子量是75也没有显影,这个目标以前做过显影出来过。请问是为什么
whilt-shirt
检查一下一抗二抗是否正确,建议重新配制新的一抗二抗
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问
酵母双杂涂二缺板不长是什么原因呢?
bamboopiggy
大问题可能是两个蛋白不互作。小问题是:有可能转化过程有问题。质粒质量不好。培养基有问题,酵母感受态不好
2 回答
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