WB内参两条带？换内参吗？

有可能是蛋白降解了，重提一下吧。

可能是胶配得有问题

也有可能是样品的问题

不换吧，换个一抗重提蛋白试试。

可能是内参被污染或者降解了，最好重新制备。

同一支抗体重新配，再借一支别人的用着好的内参作为对照，如果你的还是有问题那就换抗体

抗体的问题，没事，你这个看着很齐，可以用

首先是胶的问题，可能是浓缩胶和分离胶的tris-HCl的ph有问题，建议重新调。

western内参多条带可能的原因有：

抗体浓度过高；降低一抗、二抗的浓度。

一抗的特异性不足；使用单克隆抗体。

二抗的非特异性结合，不加一抗，其他操作不变，即可检测出二抗的非特异性的条带是否来自二抗的非特异性结合；此时需要重新选择二抗。

内参发生了降解，降解产物成为了一抗或二抗的新的抗原，尤其是在一抗或二抗不是单克隆抗体时更为明显；这只能更换新的内参了。