登录
搜索
提问
我要登录
|免费注册
首页
>
实验问答
>
蛋白质
实验问答
22,818,662 科研人在看
科研学霸天团,48小时有问必答
我要提问
全部
细胞
免疫
蛋白质
PCR
DNA
RNA
微生物
动物
遗传
生物信息
其他
问
为什么我的细胞提取液中没有目标蛋白?或者提出了很多杂蛋白
冷泉港蛋白
分子量太大了,表达不出来;也有可能同时有细胞毒性。1.你的重组蛋白分子量=27KD+130KD=157KD2.原核蛋白表达的分子量大小一般不能超过100KD(含标签);如果不表达,诱导剂浓度,温度,时间的调整方面,意义不大,不会实现从无到有的质变,只是个量变而已。3.如何解决: A.大蛋白很少使用大标签, B.截断表达 C.更换为真核表达系统 D.做实验之前先预研一下:文献和商业化蛋白的厂
4 回答
539 围观
4 回答
539 围观
去回答
问
RIP免疫互作怎么验证
Eason老歌迷
结合的RNA序列通过microarray(RIP-Chip),定量RT-PCR或高通量测序(RIP-Seq)方法来鉴定。
1 回答
504 围观
1 回答
504 围观
去回答
问
免疫荧光计数统计时选取的技术视野内如果不理想,可以增大视野吗
bamboopiggy
统计视野的大小要一样,但是可以挪位置,换个视野。
4 回答
259 围观
4 回答
259 围观
去回答
问
Elisa的细胞上清液样品可以冻存后再用吗
天一湖医者
可以,Elisa的细胞上清液样品可以冻存后再用。
5 回答
1235 围观
5 回答
1235 围观
去回答
问
做WesternBlot时,提取蛋白后冻存,条带很弱
麻黄连翘赤小豆
说明你这个蛋白已经降解了,建议重新提蛋白
4 回答
259 围观
4 回答
259 围观
去回答
问
抗原检测出的分子量比资料上的大
whilt-shirt
有可能是抗原上有其他基团导致的
3 回答
335 围观
3 回答
335 围观
去回答
问
IL-1β曝光出的目标条带与分子量不符,正常31kDa,实际在35上面。怎么回事?MDA-MB-231亲本细胞系。
whilt-shirt
这是正常现象,说明书上只是理论值,实际根据样本的不同会导致分子量增高或者降低
4 回答
278 围观
4 回答
278 围观
去回答
问
关于免疫沉淀实验的一个问题?
balalaLy
coip的原理就是用目标蛋白的抗体去拉然后分别用目标蛋白和结合蛋白的的抗体跑wb验证,或者是ip下来之后做质谱验证
3 回答
465 围观
3 回答
465 围观
去回答
问
Co-ip实验中为什么重链轻链对结果有影响?
bamboopiggy
因为你用的抗体可能会识别重链轻链,如果位置又和重链轻链接近的话,阴性对照也会出现条带。
3 回答
1032 围观
3 回答
1032 围观
去回答
问
酶联免疫实验为什么要设置复孔?
whilt-shirt
设复孔是为了降低加样和系统误差
3 回答
684 围观
3 回答
684 围观
去回答
问
COIp实验中,如果分子是55kda的话,曝光一直有杂带,怎么办呀
dxy_yrovq1i9
买去重链的二抗。稀释二抗浓度,或者换SDS-PAGE胶的浓度,把重链和IP条带那个位置分的开一些,就能截图了。
3 回答
764 围观
3 回答
764 围观
去回答
问
PGEX-4T3-GST-HIF1α蛋白纯化没有条带是为什么呢?
dxy_yrovq1i9
蛋白太大了,GST不好表达。把GST标签换成His吧,基本可以一把出。
3 回答
577 围观
3 回答
577 围观
去回答
问
为什么nlrp3做出来有很多杂带?
你好几和户
膜可以切大点,还有转膜可能没转上,找下相关文献考虑调整下转膜条件。
4 回答
199 围观
4 回答
199 围观
去回答
问
WB提蛋白浓度偏低怎么办呢?
bamboopiggy
下次裂细胞,少加点裂解液,一般wb上样20-40ug就够了。你这次的蛋白可以试试用大梳子齿的,增加上样量试试。wb,估计要看你踩到什么坑里,一步一步的解决了。各种小细节太多,包括仪器,液体,样品,膜,等等的
4 回答
3482 围观
4 回答
3482 围观
去回答
问
研磨细胞会导致蛋白质结构破坏吗?
冷泉港蛋白
研磨不会直接破坏蛋白结构。一、关于研磨步骤和裂解液1.研磨破坏的是细胞之间的黏连,将细胞分散开2.裂解液含有裂解和促融成份,裂解细胞,释放蛋白。二、了解下蛋白的结构和降解蛋白有一级结构,氨基酸共价键链接,酶和酸碱可水解;高级结构靠氢键 疏水作用 等作用维持,容易破坏,通常使用的是表面活性剂。三、了解下蛋白的大小枪头是毫米大小,细胞是微米级别,蛋白是纳米结构。1毫米=1000微米 1微米=100
6 回答
1158 围观
6 回答
1158 围观
去回答
问
请问wb检测信号通路应该怎么敷
bamboopiggy
可以切膜,按照marker切就好,如果想striping,建议先孵磷酸化的,然后striping后,再孵total的
3 回答
179 围观
3 回答
179 围观
去回答
问
如何减少杂带的产生,求解。。。
bamboopiggy
WB?封闭充分,找个好的抗体,有的没办法,抗体不好,总会有杂带。
6 回答
342 围观
6 回答
342 围观
去回答
问
荧光染色试剂培养是否能准确性高
bamboopiggy
你要用荧光染色试剂培养细胞?提高什么的准确性呢?定位的?
5 回答
222 围观
5 回答
222 围观
去回答
问
有血清换无血清饥饿后,取0h细胞培养上清用ELISA试剂盒检测酪蛋白浓度,0h浓度应是?
Eason老歌迷
有血清换无血清饥饿后,取0h细胞培养上清用ELISA试剂盒检测酪蛋白浓度,0h浓度应是0。
3 回答
272 围观
3 回答
272 围观
去回答
问
NETs诱导
Eason老歌迷
”PMA诱导人中性粒细胞胞外诱捕网(NETS)形成的方法及其结构的研究”,你可以看看祝元峰老师的这篇文章,写的很详细。
2 回答
2020 围观
2 回答
2020 围观
去回答
1
•••
104
105
106
107
108
•••
172
跳至
页
意见反馈
合作咨询
提问
扫一扫
实验小助手
扫码领资料
反馈
TOP
打开小程序