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问
Co-ip实验中为什么重链轻链对结果有影响?
bamboopiggy
因为你用的抗体可能会识别重链轻链,如果位置又和重链轻链接近的话,阴性对照也会出现条带。
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问
酶联免疫实验为什么要设置复孔?
whilt-shirt
设复孔是为了降低加样和系统误差
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问
COIp实验中,如果分子是55kda的话,曝光一直有杂带,怎么办呀
dxy_yrovq1i9
买去重链的二抗。稀释二抗浓度,或者换SDS-PAGE胶的浓度,把重链和IP条带那个位置分的开一些,就能截图了。
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问
PGEX-4T3-GST-HIF1α蛋白纯化没有条带是为什么呢?
dxy_yrovq1i9
蛋白太大了,GST不好表达。把GST标签换成His吧,基本可以一把出。
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问
为什么nlrp3做出来有很多杂带?
你好几和户
膜可以切大点,还有转膜可能没转上,找下相关文献考虑调整下转膜条件。
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问
WB提蛋白浓度偏低怎么办呢?
bamboopiggy
下次裂细胞,少加点裂解液,一般wb上样20-40ug就够了。你这次的蛋白可以试试用大梳子齿的,增加上样量试试。wb,估计要看你踩到什么坑里,一步一步的解决了。各种小细节太多,包括仪器,液体,样品,膜,等等的
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问
研磨细胞会导致蛋白质结构破坏吗?
冷泉港蛋白
研磨不会直接破坏蛋白结构。一、关于研磨步骤和裂解液1.研磨破坏的是细胞之间的黏连,将细胞分散开2.裂解液含有裂解和促融成份,裂解细胞,释放蛋白。二、了解下蛋白的结构和降解蛋白有一级结构,氨基酸共价键链接,酶和酸碱可水解;高级结构靠氢键 疏水作用 等作用维持,容易破坏,通常使用的是表面活性剂。三、了解下蛋白的大小枪头是毫米大小,细胞是微米级别,蛋白是纳米结构。1毫米=1000微米 1微米=100
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问
请问wb检测信号通路应该怎么敷
bamboopiggy
可以切膜,按照marker切就好,如果想striping,建议先孵磷酸化的,然后striping后,再孵total的
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问
如何减少杂带的产生,求解。。。
bamboopiggy
WB?封闭充分,找个好的抗体,有的没办法,抗体不好,总会有杂带。
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问
荧光染色试剂培养是否能准确性高
bamboopiggy
你要用荧光染色试剂培养细胞?提高什么的准确性呢?定位的?
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问
有血清换无血清饥饿后,取0h细胞培养上清用ELISA试剂盒检测酪蛋白浓度,0h浓度应是?
Eason老歌迷
有血清换无血清饥饿后,取0h细胞培养上清用ELISA试剂盒检测酪蛋白浓度,0h浓度应是0。
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问
NETs诱导
Eason老歌迷
”PMA诱导人中性粒细胞胞外诱捕网(NETS)形成的方法及其结构的研究”,你可以看看祝元峰老师的这篇文章,写的很详细。
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问
拿什么拯救你,我的snu182🤧🤧 2000+的血清养不活?
麻黄连翘赤小豆
看密度还可以,是否需要在培养基中加入某些生长因子刺激增殖或者改用其他好一点的血清,或者把血清浓度调高,不一定10%的血清就适合这类细胞
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问
内质网应激相关蛋白
whilt-shirt
有可能是抗体原因,也可能是样本问题
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问
问题求解答!!!急急急急!!
麻黄连翘赤小豆
跑蛋白时间久一些,我跑凋亡通路的磷酸化蛋白都是相近的蛋白,都能跑出来,自己制胶会好一些
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问
S1-PFGE 哪位大神可以告诉我是什么原因导致条带这个样子吗?
无所不至
我现在做实验也是marker有条带,S1酶切没有条带
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问
ELISA检测细胞8-OHdG
此用户已注销
小心收集上清液,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
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问
细胞代谢对于识别目的基因、蛋白质和表型很重要吗?
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研究者控制酵母细胞中主要代谢产物的水平,并探索这种改变对基因的行为和基因表达产物的影响。结果显示,细胞代谢改变能影响大约百分之八九十的基因的行为及其产物的表达。 “细胞代谢对细胞本身起到的作用远比我们之前认为的更加重要”,马库斯博士解释说,“细胞摄取的营养物质能影响几乎所有的基因。事实上,在许多情况下,这样的影响效果非常明显。改变细胞的代谢可能会完全改变基因的表达。传统的观点认为,由基因来控制营养
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问
CO-IP实验中,IGg组有条带,IP抗体是兔源的,WB抗体是鼠源的,二抗是经过预吸附处理的二抗。
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样品被蛋白酶降解,处理方法:添加蛋白酶抑制剂(protease inhibitor);所有操作保持4℃以下冰上操作并防止冻融。抗体浓度太低,处理方法:调整IP和/或IB抗体浓度, 必要时设立浓度梯度,摸索最佳浓度;抗体亲合力太低,处理方法:选用适合于IP和/或IB的相应抗体;IP抗体未与agarose珠子结合,处理方法:选用适合于IP的相应珠子, 正确保存防止变质或干燥;Tag未暴露在融合蛋白构象
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问
又是自闭的一天,怎么回事?真的走一步一个坑
此用户已注销
看样子是“反影”现象,可能是信号太强,就像是照相的时候曝光过度了,建议提高一抗和二抗的稀释倍数,缩短抗体孵育时间,如果是用ECL化学发光液的话换成低敏的会改善这种现象
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