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科研学霸天团,48小时有问必答
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Elisa的细胞上清液样品可以冻存后再用吗
天一湖医者
可以,Elisa的细胞上清液样品可以冻存后再用。
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问
做WesternBlot时,提取蛋白后冻存,条带很弱
麻黄连翘赤小豆
说明你这个蛋白已经降解了,建议重新提蛋白
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问
抗原检测出的分子量比资料上的大
whilt-shirt
有可能是抗原上有其他基团导致的
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问
IL-1β曝光出的目标条带与分子量不符,正常31kDa,实际在35上面。怎么回事?MDA-MB-231亲本细胞系。
whilt-shirt
这是正常现象,说明书上只是理论值,实际根据样本的不同会导致分子量增高或者降低
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问
关于免疫沉淀实验的一个问题?
balalaLy
coip的原理就是用目标蛋白的抗体去拉然后分别用目标蛋白和结合蛋白的的抗体跑wb验证,或者是ip下来之后做质谱验证
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问
Co-ip实验中为什么重链轻链对结果有影响?
bamboopiggy
因为你用的抗体可能会识别重链轻链,如果位置又和重链轻链接近的话,阴性对照也会出现条带。
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问
酶联免疫实验为什么要设置复孔?
whilt-shirt
设复孔是为了降低加样和系统误差
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问
COIp实验中,如果分子是55kda的话,曝光一直有杂带,怎么办呀
dxy_yrovq1i9
买去重链的二抗。稀释二抗浓度,或者换SDS-PAGE胶的浓度,把重链和IP条带那个位置分的开一些,就能截图了。
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问
PGEX-4T3-GST-HIF1α蛋白纯化没有条带是为什么呢?
dxy_yrovq1i9
蛋白太大了,GST不好表达。把GST标签换成His吧,基本可以一把出。
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问
为什么nlrp3做出来有很多杂带?
你好几和户
膜可以切大点,还有转膜可能没转上,找下相关文献考虑调整下转膜条件。
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问
WB提蛋白浓度偏低怎么办呢?
bamboopiggy
下次裂细胞,少加点裂解液,一般wb上样20-40ug就够了。你这次的蛋白可以试试用大梳子齿的,增加上样量试试。wb,估计要看你踩到什么坑里,一步一步的解决了。各种小细节太多,包括仪器,液体,样品,膜,等等的
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问
研磨细胞会导致蛋白质结构破坏吗?
冷泉港蛋白
研磨不会直接破坏蛋白结构。一、关于研磨步骤和裂解液1.研磨破坏的是细胞之间的黏连,将细胞分散开2.裂解液含有裂解和促融成份,裂解细胞,释放蛋白。二、了解下蛋白的结构和降解蛋白有一级结构,氨基酸共价键链接,酶和酸碱可水解;高级结构靠氢键 疏水作用 等作用维持,容易破坏,通常使用的是表面活性剂。三、了解下蛋白的大小枪头是毫米大小,细胞是微米级别,蛋白是纳米结构。1毫米=1000微米 1微米=100
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问
请问wb检测信号通路应该怎么敷
bamboopiggy
可以切膜,按照marker切就好,如果想striping,建议先孵磷酸化的,然后striping后,再孵total的
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175 围观
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问
如何减少杂带的产生,求解。。。
bamboopiggy
WB?封闭充分,找个好的抗体,有的没办法,抗体不好,总会有杂带。
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问
荧光染色试剂培养是否能准确性高
bamboopiggy
你要用荧光染色试剂培养细胞?提高什么的准确性呢?定位的?
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问
有血清换无血清饥饿后,取0h细胞培养上清用ELISA试剂盒检测酪蛋白浓度,0h浓度应是?
Eason老歌迷
有血清换无血清饥饿后,取0h细胞培养上清用ELISA试剂盒检测酪蛋白浓度,0h浓度应是0。
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问
NETs诱导
Eason老歌迷
”PMA诱导人中性粒细胞胞外诱捕网(NETS)形成的方法及其结构的研究”,你可以看看祝元峰老师的这篇文章,写的很详细。
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问
拿什么拯救你,我的snu182🤧🤧 2000+的血清养不活?
麻黄连翘赤小豆
看密度还可以,是否需要在培养基中加入某些生长因子刺激增殖或者改用其他好一点的血清,或者把血清浓度调高,不一定10%的血清就适合这类细胞
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问
内质网应激相关蛋白
whilt-shirt
有可能是抗体原因,也可能是样本问题
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问
问题求解答!!!急急急急!!
麻黄连翘赤小豆
跑蛋白时间久一些,我跑凋亡通路的磷酸化蛋白都是相近的蛋白,都能跑出来,自己制胶会好一些
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