如果是rna病毒，一步法可以扩出片段，用反转录成cdna，再用高保真酶扩不出来片段了，这是为啥，怎么可以看cdna有没有转成功呢

直接测DNA浓度就可以，反转前用1ug，一般反转后也差不多。

考虑可能是你的高保真酶存在问题。

如果使用一步法将RNA病毒转录为cDNA，并使用高保真酶扩增片段时出现扩增失败的情况，可能有几个可能的原因：

1. 反转录反应问题：反转录反应可能存在一些问题，如反应条件不当、反转录酶失活、核酸污染等。确保反转录反应的条件正确，使用高质量的反转录酶，并检查反应过程中是否存在污染物。

2. 引物设计问题：扩增片段的引物设计可能存在问题，如引物序列不合适、引物间相互作用等。确保引物序列与目标片段完全匹配，并避免引物之间的相互作用或二聚体形成。

3. 目标片段问题：目标片段本身可能存在结构变异、限制性酶切位点、RNA修饰等问题，导致无法成功扩增。确保目标片段的完整性和合适性，检查是否存在限制性酶切位点或其他结构特征。

为了验证cDNA是否成功转录，您可以尝试以下方法：

1. 聚合酶链反应（PCR）：使用转录后的cDNA作为模板，设计适当的引物进行PCR扩增。如果扩增出预期的片段，则表明cDNA转录成功。

2. 凝胶电泳：将扩增产物进行凝胶电泳分析，观察是否出现目标片段的带状条带。如果出现与预期大小相符的条带，则表明cDNA转录成功。

另外，如果一步法转录反应失败，您还可以尝试使用两步法进行反转录和扩增。在两步法中，先进行反转录反应得到cDNA，然后使用这些cDNA作为模板进行扩增。这种方法可能提供更高的扩增效率和特异性。

可以做cdna电泳检测看cdna是否转成功