实验问答21,855,061 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问求助‖真菌鉴定，除了ITS还可以用什么呢

sswei

真菌检查的方法包括直接镜检、真菌培养、血清学试验、组织病理检查等，最常用的就是真菌的直接镜检。真菌的直接镜检需要使用酒精清洁创面，可以收取表面的皮屑、毛发、甲板或者体液组织等。将收取的标本放在玻璃片上，加5%-10%的氢氧化钾液，盖上盖玻片，溶解一会儿，一般5分钟后可以在显微镜下低倍镜下寻找有无菌丝或者孢子，寻找到菌丝或者孢子后可以转为高倍镜进行观察。其他还有通过筛子检验，比重检验法，染色检验法，

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问请教trizol法提取外泌体RNA该如何弄。

loveliufudan

以下是Trizol法提取外泌体RNA的步骤：收集外泌体：用离心或超声波等方法收集培养基或生理液中的外泌体。建议在收集前，预先处理样品，如去除细胞残留物、碎片等。加入Trizol：向外泌体悬液中加入 Trizol 试剂，建议加入试剂体积是悬液体积的 10% 到 20%。轻轻摇晃管子使 Trizol 均匀分散。加入氯仿：加入氯仿等有机溶剂，摇晃离心管混合均匀。离心管在室温下放置5-10分钟，让混合物充

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问RNA琼脂糖电泳四根条带?

huarenqiang5

从图片及操作综合分析考虑最后一根是降解产物。

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问Trizol法提取DNA，A260/280应该在哪个范围比较好？提取的浓度一般是多少

煮栗了

1.8和2.1之前其实都可以的

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问RNAi后为啥会高表达了？

huarenqiang5

考虑可能是靶标基因功能存在一定问题。

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问想问一下为什么提的rna跑出来的条带都是这样的。理论值应该是28s:18s为2:1，但是胶图上却不是这样子的。

loveliufudan

可能有以下几个原因：样本不纯：如果你的RNA样本中存在DNA、蛋白质、盐类、酶或其他杂质，可能会影响RNA的电泳结果，导致28S和18S RNA带比例不正确。你可以通过琼脂糖凝胶电泳前对RNA样本进行纯化来解决这个问题。样本降解：如果RNA样本不完整或已经降解，可能会影响28S和18S RNA带的比例。这种情况下，你可能会看到28S RNA带出现双峰，18S RNA带的强度减弱。你可以通过在RNA

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问RNA电泳条带这样可以用吗？

土井挞克树

看着还是不错的，可以用image把细节修复一下。

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问脱氧核酶实验是什么实验？

土井挞克树

脱氧核酶实验是利用体外分子进化技术获得的一种具有催化功能的单链DNA片段，具有高效的催化活性和结构识别能力，进行未知识别的实验方法。在恶性肿瘤的研究方面有巨大前景

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问髓核干细胞sirna转染

huarenqiang5

可以借鉴一下这篇文章《骨髓间充质干细胞的转染》一、试验材料：1、LB液体造就基：称取蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，溶于800ml去离子水中，用NaOH调整PH到7.5，加去离子水定容至1L，高压灭菌20min.2、LB平板造就基：LB液体造就基中按1.5%的浓度参与琼脂，加热溶解，进行高压灭菌。取出后趁热在无菌条件下，倒入无菌的平皿中，每套平皿中参与12-15ml，

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问使用trizol法提取秀丽隐杆线虫的总RNA,线虫老是裂解不充分,呈现为一条线,想请教一下大家都是怎么裂解的?

whilt-shirt

可以考虑使用高通量组织研磨器匀浆后提前RNA

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问外周血提RNA降解

huarenqiang5

可以按以下实验步骤进行：1.收集新鲜人血液并立即用Ficoll分离白细胞。2.用冰冷PBS洗涤外周血淋巴细胞3次。3.在50ml塑料离心管中收集外周血淋巴细胞，并加入7ml裂解缓冲液(可溶解达到5×108个外周血淋巴细胞)，然后剧烈涡旋振荡以溶解细胞。4.加入7体积(49m1)4molL氯化锂，4°℃孵育15~20小时(过夜)。5.将悬液转移到30mlCorex管内，在吊桶式转头内4°℃离心2小时

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问求助各位大神，我已经做了三次血清提取RNA了，每一次的OD260/280还有260/230值都很低

huarenqiang5

这个情况主要考虑以下几点误区：1.认为4度离心很好，其实4度离心只有坏处，没有好处。2.误认为提取RNA/DNA不用跑电泳，只要测OD吸光值/OD比值就可以知道浓度和纯度。核酸纯化，大家最大的误解，就以为测出来OD值吸光值就是测出来了核酸的浓度，这个概念是不对的。测OD值，只是测总吸光值，它不能等同于测的是真实核酸浓度。总吸光值可以来源于真正的核酸，也包含来源于残留的杂质，残留的蛋白，残留的降解的

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问寻找基因上下游与miRNA之间如何调控

loveliufudan

针对您的问题，可以考虑以下步骤：构建过表达该基因的病毒，并在动物模型中进行感染；对感染后的组织样本进行RNA提取，并进行miRNA和基因的测量，比如qPCR或者RNA-seq；根据miRNA和基因的表达数据，进行相关性分析，比如Spearman相关性分析或者Pearson相关性分析，以确定这两个miRNA与该基因之间的上下游关系；进一步验证这两个miRNA对该基因的调控作用，可以采用miRNA靶向

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问RNA保存的样本不能做什么实验

bamboopiggy

rna保存的样本，你是说用rna保护剂保存的样本，是可以用来跑wb的

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问白介素1b和白介素6趋势相反

土井挞克树

先看一下是否存在负反馈通路，有时候存在负反馈通路就会趋势相反

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问miRNA与基因cds区结合

juyue2010

miRNA结合的是调控序列，构建cds区作用不大

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问求助！养的胚胎干细胞老是分化怎么办？

土井挞克树

环境不要变，保证营养供应，加入细胞因子

4 回答868 围观

问RNA核质分离法

loveliufudan

RNA核质分离法是将细胞或组织裂解后，通过离心、洗涤等步骤将细胞核和胞质分离，从而得到分离的核糖核酸（RNA）。在这个实验中，将U6 RNA作为核内参照物，通过比较其在核和质中的表达量来评估核酸提取和分离的效果。关于实验结果出现核质RNA表达差不多各一半的情况，这可能是由于以下原因之一：核酸提取不完整：在分离核和质的过程中，有可能存在某些核酸留在了另一个部分中，导致分离效果不完全。可以尝试重新优化

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问求助！测RNA浓度用TE buffer溶，RT PCR怎么办

loveliufudan

如果你需要精确测量RNA的浓度并用于后续实验，建议不要使用TE缓冲液溶解RNA，因为TE缓冲液中含有EDTA，可以抑制酶的活性，包括逆转录酶（RT），可能影响后续的RT-PCR实验。此外，TE缓冲液还含有Tris，可能影响PCR的特异性。如果你已经使用了TE缓冲液溶解RNA，建议重新提取RNA并使用其他缓冲液进行溶解，例如纯化水或RNase-free水，这些缓冲液不会对RNA分子产生抑制作用。如果

3 回答1032 围观

问求助请问这个clustered miRNAs指什么啊

土井挞克树

这个是rna序列集，就是相同的类似的一系列rna

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