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        RNA核质分离法

        相关实验:用T4 RNA 连接酶连接 RNA 分子

        user-title

        加油小雪

        请问一下有人知道这个实验,U6作为核内参,但是结果确是核质差不多各一半,用的是优宁维的盒子,这是为什么啊,求求大佬指导。

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        2 个回答

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        RNA核质分离法是将细胞或组织裂解后,通过离心、洗涤等步骤将细胞核和胞质分离,从而得到分离的核糖核酸(RNA)。在这个实验中,将U6 RNA作为核内参照物,通过比较其在核和质中的表达量来评估核酸提取和分离的效果。

        关于实验结果出现核质RNA表达差不多各一半的情况,这可能是由于以下原因之一:

        核酸提取不完整:在分离核和质的过程中,有可能存在某些核酸留在了另一个部分中,导致分离效果不完全。可以尝试重新优化分离步骤,如离心条件、洗涤液的成分、离心管的种类等,以提高核酸分离的纯度。

        核内参的选择:U6 RNA作为核内参照物被广泛使用,但在某些情况下,它可能会被轻微地表达在胞质中。因此,建议使用其他已知只表达于核内或质内的RNA作为内参照物,如18S rRNA或GAPDH等。

        数据标准化方法:在数据分析过程中,需要使用合适的标准化方法将不同实验组之间的RNA表达量进行比较。常用的标准化方法包括ΔΔCt法、标准曲线法、去除内参法等。应根据实验设计和RNA样品特性选择合适的标准化方法,并进行严谨的数据分析。

        综上所述,针对实验结果出现核质RNA表达量相近的情况,可以从核酸提取、内参的选择和数据分析等方面进行优化和检查,以提高实验结果的准确性和可靠性。

        user-title

        加油小雪user-title

        谢谢老师的解答。但是我用GAPDH做质内参。就是大部分在质里的,唯独这个U6核内参奇怪

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        更换内参在做,这个比例不太正常。

        user-title

        加油小雪user-title

        那要换成什么核内参呢

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