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        想问一下为什么提的rna跑出来的条带都是这样的。理论值应该是28s:18s为2:1,但是胶图上却不是这样子的。

        相关实验:总 RNA 提取实验

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        dxy_efuv5i55

        marker用的是2k的marke图片描述


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        3 个回答

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        可能有以下几个原因:

        样本不纯:如果你的RNA样本中存在DNA、蛋白质、盐类、酶或其他杂质,可能会影响RNA的电泳结果,导致28S和18S RNA带比例不正确。你可以通过琼脂糖凝胶电泳前对RNA样本进行纯化来解决这个问题。

        样本降解:如果RNA样本不完整或已经降解,可能会影响28S和18S RNA带的比例。这种情况下,你可能会看到28S RNA带出现双峰,18S RNA带的强度减弱。你可以通过在RNA样本制备和处理过程中采用更加温和的条件来减少RNA的降解。

        转印体积不足:如果你在转录反应中添加的RNA样本体积过少,可能会导致28S和18S RNA带比例不正确。在转录反应中添加足够的RNA样本量可以解决这个问题。

        RNA质量不佳:如果你的RNA样本质量不佳,可能会导致28S和18S RNA带比例不正确。在RNA样本制备过程中,你可以采用更加优化的方法来提高RNA质量。

        user-title

        sswei

        有帮助

        条带弱的原因可能有以下几个方面:①. 因为蛋白上样量低或目的蛋白在来源组织或细胞中的表达量并不丰富造成。可适当加大蛋白上样量,也可通过提高抗体稀释度或采用灵敏度更高的发光底物来调整,如英格恩的Enlight-plus。②. 蛋白没有充分转移到膜上。转膜后可通过预染Marker判断转膜效率,也可用丽春红染膜、用考马斯亮蓝染胶,判断转膜效率。③. 抗体效价不高,用量不足,孵育时间太短,或抗体反复使用保存不当而失活。可考虑更换效价更高的抗体,或提高抗体稀释度,延长抗体孵育时间;若怀疑抗体失活,可用斑点杂交实验确定抗体活性。④. 曝光时间太短。可适当延长曝光时间。

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        土井挞克树

        有帮助

        考虑你的rna存在降解,看条带符合降解条带

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