实验问答21,855,061 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问难消化的新鲜组织提取出的RNA建库后QPCR不合格，有什么方法可以改善？

bamboopiggy

1.将你的组织，直接放到trizo里，再进行剪碎。2.用液氮将组织冻住后，研钵内弄碎后，再加入trizol。3.买个组织提取rna的kit，可以试试。

3 回答367 围观

问【求助】提组织RNA时，为何OD值总是小于1.8

迟C迟

RNA 260/280<1.8说明有蛋白质、酚的污染。

6 回答3874 围观

问提取鱼类肠道微生物，用来做16s测序，有哪些好的方法？

bamboopiggy

找一个靠谱的公司比什么都重要，尤其是做过鱼类16s的，否则什么样的bug都会给你弄出来。甚至会测不到。

3 回答563 围观

问microRNA的提取方法和RNA提取的方法相同么?

迟C迟

原理是一样的，因为提RNA一般指total RNA。但要注意的是很多抽总RNA的方法，包括一些试剂盒，最短组分都在100nt左右。这些方法不针对miRNA，里面的某些步骤会损失大量的miRNA，如果抽提miRNA是为了定量，那肯定是不行了，建议用试剂盒。

4 回答695 围观

问提取RNA，然后做需要什么试剂及试剂盒?

迟C迟

trizol法提取RNA，trizol买invitrogen公司的，逆转录试剂盒我们实验室用的东洋坊的，效果不错。

5 回答502 围观

问从胚胎中提取RNA时，应注意哪些原则？

迟C迟

1. Trizol试剂含有苯酚，具有毒性和刺激性，注重操作。2. RNase污染的主要来源是操作过程中手和空气中的浮沉，注重配带手套，样品尽可能盖严。3. 细胞裂解必需充分且操作迅速。裂解不完全会降低最后得率，因为一部分RNA会残留在未裂解的细胞中。细胞裂解之后要看不见颗粒状物质（结缔组织和骨除外）。在清洗和裂解细胞时最好在低温下操作，防止在操作过程中释放的内源RNase降解了RNA。

4 回答629 围观

问SDS凝胶电泳的上样量大家一般用的多少啊？

未来9

一般上样体积为10-15μL（即2-10μg蛋白质）

4 回答5610 围观

问小白提问，为什么跑western blot条白出来是空白的呢？内参也是白的，苦恼死了

天一湖医者

目的蛋白没转到膜上，或者你根本没分离出来探针有问题

4 回答695 围观

问做wb的时候，经常做出来结果漂移，越来越高，是怎么回事？

丁香粉猪猪

当按照阴极-海棉-滤纸-胶-膜-滤纸-海绵依次放好后两块板不能压紧，因而在胶和膜之间可能存在潜在的间隙，电转移时蛋白从胶和膜之间的空隙中流走。使用十几张普通的草纸垫在两块海棉之间，条带就可以变得非常的漂亮。另外，转膜时转膜液要浸没凝胶和膜，否则也可能出现上述情况。

3 回答877 围观

问样品脂肪含量太多，需要增添什么步骤？

dxy_gwrp7ndq

脂肪类较多的会采用正己烷萃取等办法去除。

3 回答327 围观

问干燥RNA的时候是要干燥到什么程度最好？需要保持湿润吗？

迟C迟

最后的到RNA的上一步是酒精洗涤，提取的RNA当然不是完全干燥，提取后可以用小号枪头洗出较多的液体，剩下就在空气中自然干燥；但是太干就不容易溶解，因为太干的话RNA之间就结合的非常紧密。

3 回答932 围观

问cDNA法推断蛋白质一级结构时，引物有哪些设计要求，需要注意的问题？

府宅

1.引物最好在模板cDNA的保守区内设计。DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。在NCBI上搜索不同物种的同一基因，通过序列分析软件（比如DNAman）比对（Alignment），各基因相同的序列就是该基因的保守区。2.引物长度一般在15~30碱基之间。引物长度（primer length）常用的是18-27 bp，但不应大于38，因为过长会导致其延伸温度大于74℃，不适于Taq D

3 回答568 围观

问玉米种子胚乳和果皮怎么样能更快速的分开，以降低RNA的降解？

迟C迟

是需要提取胚乳的RNA吗？我们一般取未成熟样品，在冰上用镊子挤出胚乳迅速放入液氮，提RNA问题不大。

2 回答587 围观

问RFect系列siRNA转染试剂细胞浓度要求是多少？

dxywode

我实验合siRNA使用说明:siRNA工作浓度般10-100nM我准备用50nM做转染相同孔板同量siRNA加转染试剂量相同所我觉存质粒DNA转染与转染试剂比例同影响转染效率问题siRNA能效干扰目蛋白表达加量越应该沉默效越.合siRNA比较贵加花费合siRNA体外瞬转染干扰效致能维持2-5左右。

3 回答561 围观

问Single-nucleus RNA-seq没有线粒体基因了是吗？

万千490

1．线粒体由于含有自己的DNA等并能进行自我复制和转录、合成蛋白质而成为一套完整的核外遗传系统。 2．线粒体的结构物质，除部分可以自身合成外，同时又要依靠核DNA遗传系统的输入，是一种半独立性的细胞器。 3．真核细胞内所具有的两种遗传体系是处于互相影响、互相依存的复杂矛盾状态之中，核DNA遗传系统看来是居于主导地位

2 回答676 围观

问Rna提取提纯实验中，用来溶解RNA的DEPC水是否要经过高压处理

迟C迟

商业化的DEPC水不需要再处理。注意分装使用，以防污染。

3 回答485 围观

问原核表达中，IPTG诱导过程中，有必要摸诱导温度吗，一般最适多少度啊？

dxy_gwrp7ndq

建议室温和37度，做时间曲线(0,1,3,5,过夜)，IPTG用0.2mM，电泳检测

3 回答1362 围观

问核酸电泳跑胶量的问题

dxy_rzhv86ar

我是用5ul的上样与3u的rna 混一个点一个

4 回答553 围观

问组织小浓度低时RNA提取纯度问题

迟C迟

肯定影响后续实验的，可以多提几次，富集一下RNA，同时保证纯度，才能保证后续实验质量，不然做了也是白做。

2 回答278 围观

问rna的二级结构对全长rna反转录有何影响？怎样排除影响因素？

dxy_gwrp7ndq

AMV在高反应温度时可消除mRNA的二级结构对逆转录的阻碍

3 回答795 围观

关于丁香通

公司信息

个人用户

企业机构

无忧采购轻松科研

提问

扫一扫

实验小助手

扫码领资料

反馈

TOP

打开小程序