qPCR的结果中，三个复孔的CT值为何相差巨大

加模板时是否将头伸至液面以下，保证模板加到反应液中如果上面都没有问题那就是pcr仪器的问题了，可能孔间温度差过大

大概率是你加样不匀，有的加进去了，有的没有加进去。或者是你的pcr仪有问题了。

你该不会是在第一个孔混合了mix和cdna再分裝吧？如果不是，你可以通过加大cdna的稀释倍数，同时增加cdna上样量进行改善!

建议不加模板，先加混合体系，模板单加，操作规范

一般是加样的问题，想要避免一定要移液器准确。然后勤换枪头