实验问答21,920,751 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问QRT-PCR扩增曲线异常，断裂，不连续

bamboopiggy

跟坐标没关系，要么是你机器需要校正了，要么是你的标准品稀释的浓度梯度不够。

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问PCR电泳无扩增条带

灵枢天问

如果电泳没条带那是不是你加样有问题引物用错了？至少有一点模板吧

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问为啥pcr结果的内参13-14（偏低），但是目的基因在33-34（偏高）？？？（用的逆转录试剂曾在室温下放了一个晚上）

超级无敌小旋风

模板浓度高了，降低试试，另外看看你的引物特异性好不好

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问荧光定量PCR，可以一个实验组一个cDNA浓度做吗

bamboopiggy

不能一个组一个浓度，cdna的浓度要差不多才有可比性

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问【求助】实时荧光定量PCR内参基因溶解曲线问题

bamboopiggy

高度不是问题，只要起峰的位置一致就可以。

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问设计非编码RNA的引物应该注意什么呢？

灵枢天问

没有什么特别需要注意的，和编码RNA方法一样。

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问PCR溶解曲线问题答疑

汤姆卜丽波

溶解曲线是为了观察扩增发出荧光的片段是不是需要的产物。如果溶解曲线做出来只有单峰，且出锋位置是退火温度，那么这个是产物发出的荧光，实验结果有效。

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问请问大家溶解曲线前面凹下去是为什么？

灵枢天问

这个不影响你的结果，只要是单峰就没有非特异性结合，可能是你的样品没混匀有气泡啥的

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问qPCR产物长度会影响Ct值吗

灵枢天问

qPCR扩增过程中，扩增产物的荧光信号达到设定的荧光阈值时的所对应的扩增循环数（Cycle Threshold）。C代表Cycle，T代表Threshold。简单讲，Ct值就是qPCR中起始模板扩增达到一定产物量时，所对应的循环数。所谓“一定产物量”后续作进一步解释。和产物长度没关系

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问miR的熔解曲线有问题

bamboopiggy

这个可能是你加样不稳定造成的，你最好把所有的样品和引物的mix混匀了，然后加样确定一定加进去了。

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问引物设计时，GC含量过低提高不上去怎么办

bamboopiggy

你可以考虑酶切位点以及保护碱基里面多加几个GC就好啊。

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问关于qPCR扩增曲线异常

凌晨三点Dxy

你这个折线型比较多，而且重复性不好，大概率跟耗材如八连管质量有关，如果以前也用过没问题，那可能，那你回想下是不是气泡问题。

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问qPCR用两个内参基因

灵枢天问

你可以根据你的样品，选择表达稳定，Ct也比较合理的内参和实验组一起统计

4 回答2751 围观

问求解PCR问题

汤姆卜丽波

总RNA就全包括了，你后面逆转录要用的是你根据你自己的miRNA设计的特异性引物，得出的DNA就已经是你的特定样本了

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问PCR扩增3Kb基因片段

汤姆卜丽波

不算特别大，可以p出来的，我们p过

3 回答534 围观

问请问怎么两条DNA链杂交，怎么模拟二级结构，计算自由能呀？

bamboopiggy

你习惯用什么软件设计引物？一般设计引物的软件都可以模拟，例如vector NT，或者snapgene

3 回答1356 围观

问做PCR为什么用无酶水

genecreate

PCR原本就是Taq酶的扩增反应，水里面就不能含有其他酶；PCR用的水也是纯水

4 回答1333 围观

问合成的引物有退火温度，按照它的

申东熙老伯

可以的，也可以直接做touch downPCR。

4 回答253 围观

问PCR的对照组和空白组有什么区别？

申东熙老伯

对照分为阴性对照和阳性对照。空白对照是阴性对照的一种，指把样品换为水。阳性对照是指一定可以P出来的，结果可信的对照。

4 回答6600 围观

问关于PCR检测自动化问题

汤姆卜丽波

就是因为采样这个过程无法达到自动化呀，因为存在个体差异，全自动的话成本太高了

3 回答395 围观

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