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问
事先没有设计酶切位点,想把4500bp的片段连接T载体,适合吗
土井挞克树
可以用重组质粒转,成功率相对大一些。
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问
求PCR技术应用大全
土井挞克树
1.多重PCR可实现在同一反应管中同时扩增多个不同的片段2. 反向PCR起初设计用于确定临近未知区域的序列。反向PCR有助于研究一个基因的启动子序列;致癌染色体重排如基因融合、异位或转移;及病毒基因的整合。3. 由于序列扩增的产量依赖于模板DNA的量,所以PCR常用于对样品中DNA进行定量,常用的应用是基因表达的定量
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问
ABI 7500和Q系列荧光定量PCR仪比较
wikieq
光源:ABI7500 卤素灯光源 Q系列LED光源 故7500初始和位移后原则上需要校正光源,光源有试用寿命 不及Q系列操作性:7500安装量大 培训简单 应用广泛 老机型性价比高Q系列时尚大方 可以单机操作 无需电脑
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问
QP引物设计
bamboopiggy
一般问题不大,只要遵循了qpcr引物设计的原则,并且出来的melt curve是单峰,就可以用
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问
PCR电泳无扩增条带?
bamboopiggy
你用阳参了么? 1.扩增的酶有没有问题,2,模板有没有问题,3,加没加引物,4,扩增的程序,尤其是annealing temperature和extension time是否正确?
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问
qPCR内参基因循环数在多少合适
申东熙老伯
在限定范围内当然是最好,但不在限定范围内要是做了几次都是这样也可以用。内参在15-20之间都可以。
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问
miRNAqpcr怎么扩成这个样子 怎么让线更好点啊
土井挞克树
需要调整基线位置,让线连续上。
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问
pcr怪物
juyue2010
引物特异性不够,所以条带大小不一
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问
WGS人全基因组测序
juyue2010
不同版本,按时间排序,有更新。
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问
不同批次的qPCR结果如何校正?
土井挞克树
至少做三次,然后按照标准曲线差值校正
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问
qcr 内参跑的很好 但是mi RNA曲线跑的很丑
huarenqiang5
1.反应体系污染。2.试剂暴露在强光或高温下导致试剂失效。3.仪器长时间未校准。4.耗材与仪器不匹配。
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问
qpcr跑出来的结果很奇怪,求解
huarenqiang5
目的基因表达量偏低目的基因引物扩增效率低
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问
关于剪接体引物设计
juyue2010
在两种剪接体的共有序列上设计引物就可以
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问
重叠pcr连接长片段(7kb左右)一直做不出来 有没有大佬可以请教一下
土井挞克树
在做重叠延伸PCR时,要注意一个关键的问题,如果你用Taq酶话,会在扩增产物的3‘端多一个A尾,如果你其他条件都没问题的话,就要考虑一下是不是这个A尾影响了碱基配对的问题,可以换用平末端酶(如pfu酶)一试。
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1211 围观
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问
pcr 引物一般加多少pmol 模板又加多少量呢
huarenqiang5
引物0.1~1umol(10~100pmol),量以浓度为0.1到0.5μM进行计算。
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问
如何使对照组的数据归一
huarenqiang5
可以用“Z-score标准化”和“按小数定标标准化”使对照组的数据归一
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问
miRNA的逆转录内参在10左右,目的miR测不出来,怎么搞
dxy_rt9z23i7
我也用的诺唯赞的这两个试剂盒,逆转引物用的诺唯赞他们的软件设计的。内参和目的miRNA的引物要分开两个管子逆转,不然的话会有误差。本来基因组里内参的表达量和你的目的miRNA的表达量是不一样的,内参逆转产物之后点Qpcr的时候是要稀释的,目的miRNA的表达量一般都比较低,不用稀释,我自己是这么做的,能做出来。
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问
如何判断cdna是否降解了呢?
huarenqiang5
你保存方法都可以,结果可信度应该可以
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问
Qpcr的ct值问题
juyue2010
联系技术支持问一下,即使换系统也不至于相差这么悬殊,copy数相差好几个数量级了
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问
呼吸道合胞病毒pcr
汤姆卜丽波
正常提取病毒rna之后逆转录了就和qp一样做就可以了
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