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        关于剪接体引物设计

        相关实验:引物设计和末端标记实验

        user-title

        小李还不是教授

        图片描述

        求大神讲解这个剪接体引物怎么设计出来的,通过pcr扩增跑琼脂糖凝胶怎么显示这个实验 万分感谢

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        3 个回答

        user-title

        juyue2010

        有帮助

        在两种剪接体的共有序列上设计引物就可以

        user-title

        huarenqiang5

        有帮助

        分普通引物 和 qPCR引物设计

        普通PCR引物:目的是获得目的基因,对非特异性反应 和 引物二聚体 要求不严格

        RT-PCR 引物:目的是让目的基因按照理论值扩增,对扩增效率、特异性及引物二聚体要求严格。

        可以借鉴《qPCR引物设计》这篇文章讲的非常详细。

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        一、PCR引物设计原则

        1、引物长度一般在15-30bp

        引物长度一般为15-30bp,常用的为18-27bp,但不应大于38bp,因为过长会导致其延伸温度大于74℃,不适于Taq DNA聚合酶进行反应;

        2、引物GC含量一般为40%-60%

        引物GC含量一般为40%-60%,以45-55%为宜,GC含量过高或过低都不利于引发反应。上下游引物GC含量和Tm值要保持接近;

        3、引物所对应的模板序列的Tm值最好在72℃左右

        Tm值在72℃左右可使复性条件最佳,至少要在55-80℃之间。Tm值的计算有多种方法,如按公式Tm=4(G+C)+2(A+T),在Oligo软件中使用的是最邻近法(the nearest neighbor method);

        4、引物3’端的碱基一般不用A

        引物3’端的碱基一般不用A,因为A在错误引发位点的引发效率相对比较高。

        5、引物3’端出现3个以上的连续碱基,如GGG或CCC,也会使错误引发机率增加。

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