QP引物设计

一般问题不大，只要遵循了qpcr引物设计的原则，并且出来的melt curve是单峰，就可以用

你这个没有什么影响，引物设计主要考虑以下因素：如引物长度（primer length），产物长度（product length），序列 Tm 值 (melting temperature)，引物与模板形成双链的内部稳定性(internal stability, 用 ∆G 值反映)，形成引物二聚体(primer dimer)及发夹结构（duplexformation and hairpin）的能值，在错配位点（false priming site）的引发效率，引物及产物的GC 含量（composition），等等。必要时还需对引物进行修饰，如增加限制性内切酶位点，引进突变等。

没有太大的影响，引物的设计需要考虑多方面因素，长短只是一方面。