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科研学霸天团,48小时有问必答
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ATG8引物
loveliufudan
如果在NCBI(National Center for Biotechnology Information)的数据库中无法找到大鼠中ATG8基因的序列信息,那么直接使用大鼠中LC3-B的引物来检测ATG8的表达可能存在一些问题。这是因为LC3-B只是ATG8基因的一个亚型,而ATG8基因可能包含其他亚型或变体。在这种情况下,建议采取以下措施: 1. 更全面的搜索:尽可能尝试使用其他数据库或资源进行
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问
安装miRanda遇到的问题。
dxyc42u
重新下载安装包后再安装一次试试看
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问
Du145的p53是突变型还是野生型
dxyc42u
我也看了Du145的p53确实是突变型
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问
细胞中ROS是否可以释放到组织?
loveliufudan
细胞内的ROS可以在一定条件下释放到组织中。ROS是一类高度活跃的氧化剂,包括超氧阴离子(O2·-)、过氧化氢(H2O2)、羟基自由基(·OH)等。它们在细胞内参与许多生物过程,并且在一定程度上会被细胞内的抗氧化系统清除。当细胞内产生过多的ROS,超过了细胞的抗氧化能力时,ROS可能会逃逸到周围组织中。这可以通过细胞间连接的通道(如细胞间隙连接)或细胞外泌体等方式发生。 1. 细胞间连接:某些细胞
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问
最近要分离细胞质和细胞核RNA,请问常用的核内参基因有哪些?
是TTT
常用的核内参基因有GAPDH 、β- actin(BETA-actin) 、18sRNA、28sRNA 、B2M、ACTB、SDHA、HPRT1、ARBP
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问
扩5000多的片段,分两段扩增的,总是有突变怎么办?
loveliufudan
PCR扩增过程中产生突变可能由多个因素引起,这里有一些可能的解决方案: 1. 使用高保真聚合酶:你已经使用了高保真聚合酶,这是非常好的,因为它们比常规的聚合酶有更低的突变率。你可以尝试更换不同品牌的高保真酶,看看是否有改善。 2. 优化扩增条件:过高的扩增温度或过多的扩增循环数可能会导致DNA损伤和突变。你可以尝试优化扩增条件,例如降低扩增循环数,减少模板DNA的量。 3. 检查模板DNA质量:模
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问
做qpcr时用到的八联管需要高压灭菌吗?
dxyc42u
不需要啊,只要无酶就行,再说了八连管买回来就是无菌无酶的啊
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CNM投稿经验求助
dxyc42u
我们同学也说CNM不容易投,还是换个吧
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问
cGMP
sswei
环磷酸鸟苷(CGMP)是环核苷酸中最具生物活性的成分之一,与信号转导有关,由鸟苷酸环化酶催化GTP而生成。可用于WB,PCR等检测。
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引物设计问题
土井挞克树
可以选择98.64%那一款进行实验
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问
求助|鼠尾鉴定出现非特异条带怎么办?
balalaLy
如果购买的敲除鼠,那你的引物以及pcr程序都是公司鉴定过给到你的。那么出问题的大概率应该就是pcr试剂或者引物保存问题。
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问
PCR结果,算出来2-ΔΔCT小于1,表示什么意思啊?
dxyc42u
小于1表示要比较的那个基因是低表达的
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问
重叠延伸pcr
loveliufudan
有几个可能导致浓度低的原因和解决办法:1. 模板浓度问题:你在第一步PCR中使用三个片段以相等的摩尔比例作为模板,但没有加入引物。由于没有引物的引导,可能只有部分模板成功扩增。这可能导致模板浓度较低,从而影响下一步PCR的效果。解决办法是在第一步PCR中添加引物,使得每个片段都能够扩增。2. 引物选择和浓度问题:你在第二步PCR中添加了上下游引物,但提到引物含有酶切位点,同时Tm值较高。高Tm值的
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问
QPcr 260/230
dxyc42u
虽然260/230有点低,但你的260/280的还好着,主要看这个,所有没问题可以用
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问
请问如何构建突变体?
sswei
可采用CRISPR,T-DNA 插入,EMS 诱变等方法可以创造基因缺失突变体。
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问
转染过表达或敲低,看到荧光,就是上调下调不起作用,是什么问题
土井挞克树
上下调不起作用可能是调节蛋白存在降解或聚合,这种情况不影响荧光表现,但上下调会不起作用
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问
引物保存方法
sswei
引物合成后,经过一系列处理和纯化步骤,旋转干燥而成片状物质。没有溶解的引物非常稳定,-20℃下可保存2-3年,甚至更长。溶解后的引物-20℃下避免反复冻融,可以保存至少半年以上。如果对实验的重复性要求较高,合成的OD值较大,建议将溶解好的引物事先稀释为100μmol/L的储存液,分装数份保存于-20℃冰箱。使用前,将浓溶液稀释成工作液(10pmol/μl或20pmol/μl)后进行实验。修饰荧光引
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问
细胞量很少,能做PCR吗
来一起探讨
骨髓内流式细胞技术筛选出的细胞可以直接进行pcr检测,若细胞量较少时,可以先进行扩增获得更多样品进行后续实验。
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问
第一个是阳性对照其他是样品,样品原浓度跑pcr跑不出条带,这是稀释十倍跑出来的,2p跟稀释十倍差不多,稍微亮一点,怎么样把它提亮
loveliufudan
可以尝试以下方法来提亮条带:增加PCR循环数:延长PCR反应的循环数,以增加目标序列的扩增。请注意,过多的PCR循环可能导致非特异性扩增。使用增强剂:添加PCR增强剂,如PCR增强剂或增效剂,可以提高PCR的灵敏性和特异性。调整引物浓度:尝试不同浓度的引物来确定最佳浓度,以提高PCR的效果。优化PCR条件:进一步优化PCR条件,包括退火温度、延伸时间等,以获得更好的PCR结果。
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问
菌液PCR
灵枢天问
有可能是连接失败你转化的时候菌液带上了片段,那挑单克隆就有可能会挑到
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