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        同一样本Pcr第一天测阳性,第二天又测不出

        相关实验:反向 PCR (inverse-PCR)

        user-title

        榎月十一

        野鼠巢氏pcr筛恙虫病阳性,第一天能出阳性,第二天那个标本重测又没有阳性了,每天新的一管mix,和新的水?为什么会这样?有一个标本第一次测出阳,第二次无,第三次又是阳。测了DNA浓度300左右,260/2801.6图片描述

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        3 个回答

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        这种情况可能有以下几个原因:

        1. 恙虫感染的动态:恙虫病病毒在感染过程中的病毒载量可能会波动,特别是在早期感染时。因此,即使在不同时间点进行检测,病毒的存在和载量可能会有所不同,导致结果的差异。

        2. 样本质量差异:样本的质量可能会影响PCR结果。可能存在一些样本中的抑制物质(如血液残留、纯化剂等),可能干扰PCR反应的进行。因此,即使使用新的试剂和水,质量差异仍然可能导致结果的差异。

        3. PCR方法的灵敏度:不同时间点的PCR结果可能会受到PCR方法的灵敏度的影响。某些时间点的病毒载量可能低于PCR方法的检测限度,从而导致阴性结果。而在其他时间点,病毒载量可能高于检测限度,产生阳性结果。

        针对你提到的一个标本在第一次测出阳性,第二次无,第三次又是阳性的情况,这可能与样本中病毒的存在和载量有关。病毒的存在可能不均匀,导致在不同时间点采集的样本中病毒负载的变化。

        此外,DNA浓度和260/280比值的结果可以提供有关DNA的纯度和质量的信息。一个260/280比值为1.6的结果表明DNA的纯度可能较高,但并不能确定PCR结果的可靠性。

        如果你需要进一步了解结果的稳定性和一致性,建议考虑进行更多的样本测试,包括从不同时间点采集样本,并与其他检测方法(如病毒分离、抗体检测等)进行比较。

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        榎月十一user-title

        您好,我是先把鼠脾提取DNA核酸,然后在跑巢氏pcr,然后第一天跑出阳性,第二天还是吸取2ul的DNA,一样的流程,怎么就出不来,我很担心是前面一天的阳性污染,或者空气中或者哪里的污染。但是一版只出来了一个阳性还很亮!请问污染的可能性大吗?我把这几个送出去一代测序结果是恙虫病,但是这好像还是不能排除是不是污染。麻烦您分析一下,谢谢!

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        第二次可能是试剂或者检测条件失误,不用担心,重复三次就可以。

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        榎月十一user-title

        您好,我是先把鼠脾提取DNA核酸,然后在跑巢氏pcr,然后第一天跑出阳性,第二天还是吸取2ul的DNA,一样的流程,怎么就出不来,我很担心是前面一天的阳性污染,或者空气中或者哪里的污染。但是一版只出来了一个阳性还很亮!请问污染的可能性大吗?我把这几个送出去一代测序结果是恙虫病,但是这好像还是不能排除是不是污染。麻烦您分析一下,谢谢!

        user-title

        dxyc42u

        有帮助

        样本应该没问题,有可能是第二次操作不当

        user-title

        榎月十一user-title

        您好,我是先把鼠脾提取DNA核酸,然后在跑巢氏pcr,然后第一天跑出阳性,第二天还是吸取2ul的DNA,一样的流程,怎么就出不来,我很担心是前面一天的阳性污染,或者空气中或者哪里的污染。但是一版只出来了一个阳性还很亮!请问污染的可能性大吗?我把这几个送出去一代测序结果是恙虫病,但是这好像还是不能排除是不是污染。麻烦您分析一下,谢谢!最离谱的是,前一天阳性不出来了,但是又出了我今天要测的鼠脾dna

        有新的阳性

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