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        pUC19质粒

        相关实验:质粒的制备

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        1Q11G

        pUC19质粒 可以用作构建重组菌来表达外源蛋白吗

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        3 个回答

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        堃堃莹莹

        有帮助

        可以的他可以作为外团表达载体但目前很多好人用这些

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        是的,pUC19质粒通常可以用作构建重组菌株来表达外源蛋白。pUC19是一种常用的质粒,具有小分子量(约2.7 kb)和高复制数。它包含了一系列的功能元件,如起始子(origin of replication,ori)和选择性标记基因(如抗生素耐药基因)。

        为了表达外源蛋白,您需要在pUC19质粒上构建一个含有目标蛋白编码序列的表达载体。常见的构建方法包括以下几个步骤:

        1. 选择合适的限制酶切位点:根据您的目标蛋白编码序列,选择合适的限制酶切位点。这些位点应该不会与pUC19质粒上已有的重要功能元件(如ori和选择性标记基因)发生冲突。

        2. PCR扩增目标蛋白编码序列:使用引物,进行PCR扩增目标蛋白的编码序列。

        3. 限制酶切和连接:通过限制酶切将目标蛋白编码序列和pUC19质粒进行切割,然后使用DNA连接酶将两者连接起来。

        4. 转化重组菌:将构建好的pUC19载体导入到宿主细胞中。可以使用化学转化或电穿孔等方法将质粒转化到细菌(如大肠杆菌)中。

        5. 筛选重组菌株:由于pUC19质粒含有选择性标记基因(如抗生素耐药基因),您可以使用相应抗生素对转化后的细菌进行筛选。只有携带了重组pUC19质粒的细菌能够在含有抗生素的培养基上生长。

        请注意,pUC19质粒是一种常用的表达载体,但其限制是质粒大小有限,不适用于大型蛋白质的表达。此外,pUC19的高复制数可能导致高表达的外源蛋白在细菌中聚集形成包涵体。因此,对于高表达和大型蛋白质的需求,可以考虑其他表达系统或更适合的表达载体。

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        土井挞克树

        有帮助

        pUC19质粒可以用作构建重组菌来表达外源蛋白

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