求问关于质粒转酵母的问题

考虑问题出在质粒上，首先需要对质粒进行电泳检测，电泳结果需为大小正确且明亮的条带；其次核对筛选培养基的选用和配制是否正确；排除上述因素，就需要复查酵母菌的外观气味是否正常，或者进行镜检。

引物的连接是否正常，引物不恰当的话会出现你说的情况

对于第一个问题，转质粒不长菌的原因可能有以下几个方面：

质粒质量不好：质粒质量不好可能导致转化效率低下，因此可以尝试更换质粒，或者重新制备质粒。

酵母菌株不适合：不同的酵母菌株对质粒的接受能力有所不同，如果使用的酵母菌株对该质粒不敏感，可能会导致转化效率低下，可以尝试更换酵母菌株。

转化条件不好：转化条件包括电穿孔条件、转化液组成、转化时间等等，不同的质粒可能需要不同的转化条件，可以尝试优化转化条件，比如调整电穿孔电压和电容、改变转化液组成、增加转化时间等等。

对于第二个问题，阴性对照总是长菌的原因可能是：

阴性对照有污染：阴性对照可能存在细菌污染，可以重新制备阴性对照，或者通过其他方法检测阴性对照中是否存在污染。

转化液有问题：转化液中可能存在有利于细菌生长的成分，可以重新制备转化液。

转化条件不合适：如果阴性对照总是长菌，可能是转化条件不合适，可以尝试优化转化条件，如调整电穿孔电压和电容、改变转化液组成等等。

综上所述，要提高质粒转化的效率，可以考虑更换质粒、酵母菌株，优化转化条件等方法；对于阴性对照总是长菌的情况，可以重新制备对照，检测转化液中是否存在有利于细菌生长的成分，优化转化条件等。