求问DNA片段连接pEASY vector
相关实验：用大肠杆菌 DNA 聚合酶 I Klenow 片段及单链 DNA 模板进行双脱氧测序实验
月月年年总相见
我有个2800多长的片段，DNA扩增、胶回收、连pEASY、转化到大肠杆菌感受态、涂板、挑点、菌液PCR，可是菌液PCR一直不出带，都是100左右的引物二聚体，之前有三个片段都成功连上了，测序也正确，那操作应该没问题，我怀疑是片段扩增的不对，我又用新的模板重新扩增，但是菌液PCR还是不出带，我不知道是什么原因，求请前辈们指点一下我吧，万分感谢
2 个回答
huarenqiang5
有帮助
建议用质粒、电泳、菌落PCR进行验证，也可能是菌液时，细菌表面的质粒已被稀释了很多倍，所以P不出来。
月月年年总相见
就是先提质粒，再用质粒做模板PCR、电泳看条带吗？
土井挞克树
有帮助
考虑还是引物不合适，你换个引物试一下。
月月年年总相见
我能拿这个引物扩增还有送测序，会是引物的问题吗
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