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        用大肠杆菌 DNA 聚合酶 I Klenow 片段及单链 DNA 模板进行双脱氧测序实验

        实验分类:

        DNA 实验

        最新修订时间:

        简介

        当 Sanger 及其同事建立第一个 DNA 链终止延伸法时,只有一种合适的 DNA 聚合酶可用,即大肠杆菌 DNA 聚合酶 I Klenow 片段。它具有在模板存在时聚合 dNTP 的活性,但缺乏完整聚合酶 I 的 5'-3'外切酶活性。本实验来源于分子克隆实验指南(第三版)下册,作者:〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。

        来源:丁香实验

        操作方法

        用大肠杆菌 DNA 聚合酶 I Klenow 片段及单链 DNA 模板进行双脱氧测序实验

        材料 缓冲液和溶液 试剂、缓冲液,储液的组成参见附录 1, 储液使用前稀释到适当浓度。 dATP(0.1 mmol/L) 可选,参见步骤 4。 去离子蒸馏水 EDTA(10 mmol/L,pH8.0) 延伸/终止混合液和示踪混合液 这些反应混合液可通过混合 dNTP 和 ddNTP 储液制备,参见表 12-7。 甲酰胺上样缓冲液 TM 缓冲液 100 mmol/LTris-Cl(p

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