pDONR221质粒酶切不完全求助

LayyaL

2022-08-16

请同行帮忙指点一下，我实在不知道问题出在哪里了？

利用gateway重组方法，通过BP反应得到了质粒pDONR221-X，测序无误。为接下来做LR反应，将pDONR221-X用Mlu I内切酶进行酶切，获得线性pDONR221。

酶切产物跑胶时，目的条带处老是弥散，纯化后，再跑胶还是有质粒的条带。

增加内切酶的用量，延长酶切时间，减少质粒用量都试过了，但就是有未切开的质粒。

不知道有无同行也遇到此类的问题，求赐教。

此胶图为Mlu I酶切后的结果

图片描述

Eason老歌迷

2022-08-16

有帮助

可能是你的酶切时间有些长，因为定性试验，产物的量不甚准确，建议将酶的量做一个梯度，但不是将酶浓度稀释。或者是镁离子浓度可能有些不适合，建议做一下调整。

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