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        ECOR1做单酶切后去磷酸化,为何连接不出重组的目的质粒?

        相关实验:重组质粒的连接、转化及筛选

        user-title

        丫丫9

        质粒来源的载体和目的基因都用 ECOR1做单酶切,之后都去磷酸化,摩尔比1:3连接,为何连接不出重组的目的质粒?师姐师兄们双酶切的摩尔比是1:3-1:5,是不是单酶切的摩尔比不是这个,和双酶切不一样?恳请同仁赐教~~
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        1 个回答

        user-title

        赵志斌_001

        有帮助
        建议单酶切后不要去磷酸化了,载体和基因比例1:10左右,连接好后涂板,然后菌落PCR(一条通用引物+一条特异引物)鉴定10个左右的单克隆,有阳性的就行了。
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