- ￥2180
- TIANGEN
- 中国
- DP215-02
- 2025年12月21日
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- 详细信息
- 询价记录
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
室温 15℃ 至 30℃ 干燥保存
- 保质期：
15个月
- 英文名：
DNA Bisulfite Conversion Kit
- 库存：
大量
- 供应商：
天根生化科技（北京）有限公司
- 规格：
50次
本产品是特别针对 DNA 甲基化研究中的 DNA 重亚硫酸盐转化所开发的试剂盒。试剂盒可以在 2 h 内完成对 DNA 样品的处理，其中未甲基化胞嘧啶转化为尿嘧啶的转化率高达 99% 以上。同时，本试剂盒采用独特的 DNA 保护剂组分，使得转化后 DNA 的质量和回收率都有很大的保障，另外，本试剂盒还采用了柱上去亚硫酸基团的方法，使得整个操作流程更为简便。
■ 简单快速：转化和纯化流程可在 2 h 内完成，对仪器设备要求较低，适于各级研究机构对 DNA 样品进行重亚硫酸盐转化。
■ 转化率高：DNA 样品中未甲基化胞嘧啶转化为尿嘧啶的转化率高达 99% 以上。
■ 反应灵敏：本试剂盒可处理少至 500 pg，多至 2.5 µg 的 DNA 样品。
1．第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在 15 ml 漂洗液PW中加入 60 ml 无水乙醇，以及在 10 ml 缓冲液DB中加入 30 ml 无水乙醇。
2．若处理的DNA样品少于100 ng，那么强烈建议将 Carrier RNA 加入到结合液 PB 中，至终浓度为 10 μg/ml。
3．所有的离心步骤都为使用台式离心机在室温下进行。
4．纯化DNA前请使用平衡液 BL 处理吸附柱，这样可以激活硅基质膜，提高得率。
未甲基化的“C”转化为“U”的比率
以人类基因组为实验材料，经本试剂盒处理，样品回收率可达65%，未甲基化的“C”转化为“U”的比率达99% 以上。
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- 作者
- 内容
- 询问日期
文献和实验[1] Wang S, Zhao X L, Li C, et al. DNA methylation regulates the secondary metabolism of saponins to improve the adaptability of Eleutherococcus senticosus during drought stress[J]. BMC genomics, 2024, 25(1): 330.
[2] Liu K, Xu Y. Downregulation of TET2 Contributes to Nasal Polypogenesis Through Hypoxia-Inducible Factor 1α-Mediated Epithelial-to-Mesenchymal Transition[J]. Clinical and Experimental Otorhinolaryngology, 2023, 17(1): 64-77.
DNA 样品，将未甲基化的胞嘧啶（C）转化为尿嘧啶（U）。重亚硫酸盐处理不会影响甲基化的胞嘧啶（m5C） 。为了检测甲基化位点，一对引物经设计带有鸟嘌呤（G），可与目标序列中的 m5C 配对；为了检测未甲基化位点，另一对引物带有腺嘌呤（A），可与重亚硫酸盐转化分子中的U配对（随后，与后续 PCR 循环中的胸腺嘧啶（T）配对）。通过引物配对得到的阳性 PCR 扩增结果可用于确定位点的甲基化状态（图 7）。 图 7.甲基化特异性 PCR 第一步，使用重亚硫酸盐处理 DNA 样品，将未甲基化的胞嘧啶转化
脱氨基转变成尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶保持不变（见图1），行PCR扩增所需片段,则尿嘧啶全部转化成胸腺嘧啶，最后,对PCR产物进行测序并且与未经处理的序列比较,判断是否CpG位点发生甲基化。此方法是一种可靠性及精确度很高的方法，能明确目的片段中每一个CpG位点的甲基化状态，但需要大量的克隆测序,过程较为繁琐、昂贵[27]。 图1：重亚硫酸盐处理过程示意图。DNA经重亚硫酸盐处理后，甲基化的胞嘧啶不变，未甲基化的胞嘧啶转变为尿嘧啶 2.2.3 甲基化特异性的PCR（methylation
LightCycler通过实时荧光PCR技术进行DNA甲基化分析
的定量。 更多有关特定CpG位点的甲基化的详细信息，可采用重亚硫酸氢盐修饰后测序分析。 LightCycler主要应用：实时荧光PCR技术进行快速准确的DNA甲基化分析 我们使用罗氏诊断公司的LightCycler®480高分辨熔解扩增试剂盒在LightCycler®480实时荧光PCR仪上，通过MS-HRM测定法对两种已知的经过启动子（FANCE和MGMT）甲基化的DNA修复基因的检测性能。 材料和方法 将多种细胞株的DNA样本作为检测模板。每μg的每种DNA样本都经过重亚硫酸盐修饰
