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科研学霸天团，48小时有问必答

问做出来的有差异表达的蛋白，又做了一批用WB的无差异？

Du杜杜杜

p 0.03，这个值很大的了，假阳性率很高，一般至少都是p＜0.05.蛋白质组学是一个非靶向的实验，并不是一个靶向实验，所以有假阳性的结果是很正常的，即使验证也是选取的P值较小的，且FC值变化较大的。

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问流式与werstern的区别？

sk1981521

1、Western 是检测蛋白表达的金标准，可用于检测细胞多种类型的蛋白；流式细胞术的方法多用于检测细胞膜蛋白，虽然也可通过Triton-X100给细胞打孔的方法来检测胞内蛋白，但对于分泌蛋白却是无能为力的； 2、Western测蛋白含量对抗体的量需要很少，一般1：1000左右，而流式对抗体的需要量很大，一般1：50（很浪费抗体）； 3、采用Western方法检测细胞蛋白含量的变化一般要有内参，而

13 回答1798 围观

问怎样用流式细胞仪来鉴定小鼠BMDC？

西柚味的芋圆

这个BMDC是从小鼠骨髓冲洗出来的细胞，在体外用IL4和GM csf1刺激七天培养行成的细胞吗？单纯看纯度的话，我觉得 CD11c就可以了吧

8 回答2752 围观

问请问流式细胞术单抗直接荧光需要几种对照？

dxy_zutyknhe

先确定你用的直标抗体的荧光染料，然后确定该抗体的来源总属，选择相应的同型对照

12 回答326 围观

问流式细胞仪检测细胞凋亡结果分析问题

莹啊免疫啊

感觉分群分的不太好，至少得重复三遍才行，试试看第二遍时候会不会好一点。

7 回答2563 围观

问凋亡分析处理细胞时大部分细胞都处于pi坐标的负轴是什么原因？如何处理？

西柚味的芋圆

电压太低了，你做的时候一定要用单染管去调好电压

18 回答1346 围观

问流式细胞技术测定细胞内游离钙浓度为何要使用氯化钙？

peaceful13

主要为了保持缓冲液的钙离子浓度～避免影响最终实验结果，因为胞内外离子浓度差异较大～会快速引起钙离子的变化

7 回答486 围观

问除了流式细胞仪pi法还有有哪些实验可以检测细胞周期？

西柚味的芋圆

好像有跟周期比较密切的一些蛋白，Ki67、PCNA可以看下

8 回答765 围观

问流式细胞仪如何实时监测胞内钙内流？

西柚味的芋圆

把横坐标设置为为时间，纵坐标做为线性荧光强度。先上样跑一小会儿，然后不操作软件，取出样品管加入离子霉素混匀，再收集一小会儿，可观察到往上走的曲线

6 回答1738 围观

问流式细胞术测不同浓度LPS刺激12h后RAW264.7 ，ROS 结果分析问题

西柚味的芋圆

你做这个的时候有没有用考虑到自发性荧光的影响。同时巨噬细胞类的检查需要先孵育Fc

9 回答3856 围观

问流式细胞周期模型 RMSD 值为什么这么大？

dxy_0mxazdaw

这个与你流式电压调的太大有关系。另一方面，加入的染料或者抗体浓度有可能过高，建议新买的抗体或者染料做一个梯度稀释，寻找到最合适的染色浓度。

6 回答2686 围观

问检测细胞中叶绿素的绝对值计算问题

西柚味的芋圆

感觉不太行，为啥不用液相色谱或者别的方法。一定要测的话，可以，用特定浓度的标准品用流式跑标准曲线进行检测

4 回答404 围观

问如何有效提升特异性荧光染色的方法？

lyang556

用石蜡包埋，然后切片尽量切薄（3μm），可使细胞轮廓清晰。用0.1%硼氢化钠室温处理20分钟，然后0.5%苏丹黑室温处理3分钟，以降低自发荧光。

15 回答538 围观

问关于RNAi转染效率的问题

丁香实验

不知道你是采用反义核苷酸还是siRNA，是直接导入anti－sense或者siRNA片段还是采用构建干扰质粒的方法，如果是直接导入寡核苷酸片段，只能采用特定的干扰转染试剂，推荐Ambion公司的转染试剂，如果是构建的干扰质粒，则可以采用质粒通用转染试剂，比如罗氏的FuGENE 6，效果不错。上述两种试剂都可用于普通质粒转染，优点是操作程序简单，尤其是Ambion的细胞毒性小。我做过许多细胞株，包括

1 回答774 围观

问原核生物与真核生物翻译起始阶段有何异同？

丁香实验

相同之处：（1）都需生成翻译起始复合物；（2）都需多种起始因子参加；（3）翻译起始的第一步都需核糖体的大、小亚基先分开；（4）都需要mRNA和氨酰- tRNA结合到核糖体的小亚基上；（5）mRNA在小亚基上就位都需一定的结构成分协助。（6）小亚基结合mRNA和起始者tRNA后，才能与大亚基结合。（7）都需要消耗能量。不同之处：（1）真核生物核糖体是80S（40S+60S）；eIF种类多（10多

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问怎样用流式细胞仪来鉴定小鼠BMDC？

丁香实验

检测小鼠BMDC主要是从形态学和细胞表面分子两方面来鉴定我做的时候就做了普通光镜下形态、电镜（扫描和透射），另外检测了小鼠BMDC表面的共刺激分子如CD86、CD11、CD80。还做了MHC II类分子的检测，还有MHCI类分子的检测，这些分子在DC表面都不是特异存在的，在巨噬细胞、淋巴细胞表面也有表达，所以目前并没有非常特异性的方法检测你的细胞一定就是DC，但是从形态和表面分子的检测结合来看，效

1 回答810 围观

问细胞转染后总是污染，求指教

波儿小芒

我建议你换个液看看，看镜头里面的图片，不太像是典型污染。如果液体不澄清，背景脏，那可能真的是污染。没事儿，你正常换液，主要操作的时候别与其他细胞一起操作。每次换液的时候，先用双抗原液清洗一下细胞。就算是细菌污染也不太要紧，一般通过抗生素洗涤和换液频率都能够挽救回来。当然了，如果你的细胞不是很珍贵，那你要评估一下有没有挽救的必要。

4 回答2114 围观

问流式细胞技术测定细胞内游离钙浓度为何要使用氯化钙？

LM0309w

1、流式细胞仪上的FL2-W FL2-A FL2-H 分别是做什么的？FL2-W是只检测荧光的脉冲宽度， FL2-H是指脉冲高度。通常在做细胞周期分析时应用，用于去除粘连细胞。2、流式同型对照怎样选择？同型对照（IsotypeControl）：使用与一抗相同种属来源、相同亚型、相同剂量和相同的免疫球蛋白及亚型的免疫球蛋白，用于消除由于抗体非特异性结合到细胞表面而产生的背景染色。如果一抗是多抗，可以

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问流式中检测细胞表面和细胞内蛋白表达水平的抗体有何区别？

丁香实验

抗体只是针对相应抗原的，至于是针对胞内还是胞膜对你检测来说并无明显影响，你只需要查清楚到底是针对哪一个部位的抗原的，应该是可以用同一种抗体进行检测的，在流式操作时只需注意：如果是针对胞内，则需要加破膜剂，让抗体能和相应抗原接触，否则就不需要了。

1 回答577 围观

问流式细胞仪检测细胞周期是否需要鸡红细胞作参照？

丁香实验

不用，标准微球做完laser alignment（光路校正）就可以了。尽量把微球的各色CV值控制在1.5以内。

1 回答424 围观

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