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        流式细胞仪如何实时监测胞内钙内流?

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        丁香实验

        我想测定细胞内钙离子内流情况。打算用Fluo4-AM,用流式细胞仪检测加入干预后胞内钙离子变化。我想请教大家,文献中的这幅流式图(上图)是怎么做出来的呢?如何在上机的时候能够显示这样的图形?随时间动态改变?还是后期其他软件合成?文献中的方法见下图。

        图片描述问了做流式的老师,说貌似只能静态检测某个时间点的MFI。实在很疑惑,请有经验的人解答!(注:只是针对流式细胞仪如何做出这样的图求教,激光共聚焦跟分光光度计方法大家可忽略~)

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        6 个回答

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        西柚味的芋圆

        有帮助
        把横坐标设置为为时间,纵坐标做为线性荧光强度。先上样跑一小会儿,然后不操作软件,取出样品管加入离子霉素混匀,再收集一小会儿,可观察到往上走的曲线
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        CXCR3

        有帮助
        将负载fluo-4/AM的细胞上机,根据FSC和SSC值选取淋巴细胞,纵轴检测荧光值,横轴显示Time。先在稳定情况下收集细胞30-60s,然后快速加入刺激抗体后,再收集信号变化10min左右。在流式软件上分析就可以显示出这种图形。
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        dxy_29k93ve4

        有帮助
        新版flowjo有个kinetics功能,可以显示横轴是时间,纵轴是荧光强度,也可以叠加图
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        peaceful13

        有帮助
        流式检测钙流~横轴为流式仪器上的Time参数~纵轴为荧光的通道参数~收集一段时间样本后~快速加入刺激剂~然后再继续收样~就可以看到参数的增高变化了~
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        dxy_0mxazdaw

        有帮助
        先用流式跑一段静息状态下的细胞,得到basal曲线,然后暂停细胞收集,向流式管中加入刺激剂,再继续收集细胞,就会得到如文章中的升高曲线了。
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        txs900416

        有帮助
        采集数据时用双指数直方图,x轴为时间,y轴为线性荧光强度。先收集样品约1min,然后不操作软件,快速取出样品管加入离子霉素混匀,再收集约5分钟,可观察到信号的上升。
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