实验问答22,846,809 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问96孔细胞板洗板，细胞老是萎缩或者没了

dxy_gwrp7ndq

可以用排枪轻微吸打，然后再把细胞培养基靠一侧吸出来，尽量减少与板底部的接触，用吸水纸吸一下

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问Wb半定量怎么做，怎么标定？

txs900416

所谓的半定量，是将各样品目的蛋白量分别除以其内参含量，得到的数值即为内参校正后的各样品中目的蛋白相对含量，再用此数值进行样品间的比较和分析，得到目的蛋白含量在不同样品间的实际变化结果，是一个比值差异的统计学分析。

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问请问为什么同一条带，每次涂显影液会出来趋势不一样的结果？怎么样涂才能使结果更准确？

txs900416

一般考虑是显影液涂抹不均匀，曝光时间不一导致。建议将胶浸泡入显影液几十秒，再拿出来曝光

2 回答449 围观

问ELISA可以检测外泌体吗？不用来源的样本前期处理对实验结果有很大影响吗？

Omiget12

基本很少用这种方法检测外泌体。大多用的是WB检测外泌体蛋白，NTA检测外泌体颗粒数和大小，电镜观看外泌体形态。这三种是最常用的

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问怎么设计实验用CO-IP（CO-Immunoprecipitation）验证两个蛋白是否互作呢？

txs900416

最基本的方法是用ip级别的抗体钓取一个蛋白，跑wb检测是否钓取的蛋白中是否有另外一个蛋白的存在。如果没有ip级别的抗体，则需要在细胞系中共表达两个蛋白，使得其中一个带tag（例如his，ha，flag等），使用抗tag的抗体钓蛋白，检测另一个蛋白，从而验证蛋白是否互作

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问请问免疫细胞和肿瘤细胞共培养怎么操作

dxy_gwrp7ndq

因为淋巴细胞是悬浮生长，而肿瘤细胞一般要贴壁生长，所以可以采用简单的混合共培养的方法；如果是要有效的刺激淋巴细胞，选用合适的DC细胞也很关键；如果是要检测细胞因子的作用，也可采用共培养的方法；总之，目的不同，方法也不尽相同可以尝试这样一个方法,目的是看人外周血细胞是否被肿瘤细胞所刺激：肿瘤细胞贴壁培养，3000拉德照射或丝裂霉素处理使得细胞不再增殖，但仍保持存活，提取人外周血单个核细胞，与肿瘤细胞

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问红色蛋白使用什么拷贝数的质粒可以更好的显色？

txs900416

取决于表达及细胞毒性之间的一个平衡，之前一些红色蛋白易形成多聚体且有细胞毒性，所以表达多的容易导致细胞死亡。后来经过改进这些红色荧光蛋白毒性都减弱了，一般来说对于稳转株拷贝数高低无所谓，对于瞬转还是建议用高拷贝质粒

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问如何选择合适的诱导剂并设计诱发炎症反应的梯度实验？

府宅

用实验来测定诱导时间比较容易，培养多瓶菌液（起始浓度要一样且要非常小，要来自同一菌株，最好先挑菌富集，然后平均分装到至少每瓶35mL的培养液里），放到摇床上摇，每隔一段时间去测OD600值，画生长曲线，看图画到指数中期时候就可以诱导了。若时间确定，那么可以设置诱导剂浓度为梯度0.1-1.0去测试哪一个浓度是最适的。设置方法和时间是一样的，注意哪些浓度等的变量要一样。温度就设置温度梯度喽，诱导剂浓度

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问求CHIP实验的详细步骤？

府宅

1) 将细胞或组织进行固定（交联）与裂解该步骤是在新鲜组织或活细胞中加入甲醛（终浓度1%），目的是稳定蛋白与DNA天然结合的状态，以免后续的实验步骤破坏这种相互作用。在固定完成后，细胞或组织进行充分裂解。固定时间一般为5-10 min，太长的固定时间将不利于后续的染色质片段化。强相互作用，如目的蛋白是组蛋白，固定时间应短一些：3-5 min。弱相互作用，尤其是间接相互作用蛋白，可适当延长固定时间，

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问wb 条带异常问题的出现原因？

dxy_gwrp7ndq

1、阴性结果的原因1) 二抗条件过低：提高二抗浓度、延长二抗孵育时间或孵育温度2) 一抗条件过低：提高一抗浓度、延长一抗孵育时间或孵育温度3) 抗原过少：提高上样量4) 抗体种属不兼容：一抗species reactivity中是否有需要检测样品的种属来源，一抗与二抗是否相匹配5) 酶活性：二抗上标记的HRP或AP等酶活性降低，如抗体过期或反复化冻等6) 封闭过度或封闭剂不兼容：降低封闭剂浓度、缩

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问请问一下包埋块切大了怎么办

府宅

最简单的方法就是把组织块修一下，分成2～3块包埋

3 回答320 围观

问免疫切片越薄越好吗？

小布丁瑶瑶

冷冻切片并不是越薄越好，普通组织厚度约6微米即可，过薄，则易造成组织皱缩和镜下细胞核的碎裂。但是淋巴组织由于细胞间质少，切片可达4-5，脂肪组织要8-9方可观察到完整的脂肪细胞。组织结构单一的可薄切，含脂肪多的，结构复杂及硬度较大的可适当厚切。总之，以切出完整，平滑的切片为准。切好的组织在干净的玻片上黏附时顺着一个方向稍微用力轻轻一带，可避免组织摊片过程中皱褶，保证组织结构的完整及切片的美观。

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问wb怎么进行归一化，标定内参蛋白，如何确定上样量？

dxy_gwrp7ndq

你做好实验的“阳性对照”、“阴性对照”，然后保持与“试验处理样品”同样的样品上样量，再然后对pvdf膜进行剪切以及分别的抗体（内参抗体、目标蛋白的特异性抗体）孵育就可以很放心地做后续分析了。

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问免疫组化染色怎样做效果更好？

LFF520宣城

为达到免疫组织化学技术的要求，组织固定越新鲜越好；组织脱水必须彻底干净；切片必须完整、均匀、平展、无邹折；切片的附贴必须牢固，必须使用合适的粘贴剂；切片必须烘烤附贴牢固，既要经得起抗原修复时高温的作用而不使轻易脱片，又不至于破坏抗原；切片脱蜡必须干净，否则将会影响免疫组化染色的最后结果。

3 回答392 围观

问除了空气过滤系统，还有可靠的去除核酸污染清洁剂吗？

府宅

对可疑器用稀酸进行擦拭或浸泡，紫外线照射，对反应液用DNaseⅠ或内切酶进行处理等方法。

3 回答470 围观

问请问，雌雄C57老鼠做在体实验差异会很大嘛？有哪些疾病模型使用雄性C57，那些模型选用雌性C57呢？

txs900416

雌雄会有一定差异，例如，ConA注射的雌鼠肝损伤比雄鼠要重；eae在雌鼠中发病较高和严重，雄鼠则不敏感；器官移植中一般使用雄性c57做受体，因为好补液

1 回答1244 围观

问基础实验的结果和临床观察不一致，容易发文章吗？

陈文豪平邑

不容易，临床医生在临床试验的设计和实施过程中扮演重要角色，同时，临床医生、临床试验方法学家、临床试验管理专业人员通力合作，才能确保临床试验的高质量设计、实施、分析和报告。

9 回答724 围观

问如何解决容量瓶刻度上方液体沾壁问题

今天摆烂了咩

1.容量瓶清洗至无水珠挂壁，晾干备用2.定容时候悬空3.滴加之后可以静置片刻

5 回答1697 围观

问减重法称量时，如何避免产生负值？

候季雨

避免天平周围环境气流波动，称量纸位置放准确。

8 回答1351 围观

问重症肌无力进展期免疫类药物使用的实用性有多高？

349 围观

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