wb怎么进行归一化，标定内参蛋白，如何确定上样量？

你做好实验的“阳性对照”、“阴性对照”，然后保持与“试验处理样品”同样的样品上样量，再然后对pvdf膜进行剪切以及分别的抗体（内参抗体、目标蛋白的特异性抗体）孵育就可以很放心地做后续分析了。

一般先检测总蛋白浓度，使用bca法等，然后上样一般使用5-20ug都可以，表达量特别低的蛋白上样量要更高，表达量高的可以适当减少上样量。例如组蛋白H3，只需要一点点样本（1-2ug）就可以得到很好的曝光条带。