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科研学霸天团，48小时有问必答

问大家有没有提过植物细胞外囊泡或者叫外泌体或外泌体样纳米颗粒

天一湖医者

步骤：(1)上清液分离：将细胞培养后的培养基，离心去除杂质，分离出培养上清液；(2)一次提取：将步骤(1)所述培养上清液与外泌体提取液混合后进行孵育，孵育后得第一孵化液，对第一孵化液进行离心浓缩，得到含外泌体的浓缩液；(3)二次提取：将步骤(2)所述含外泌体的浓缩液加入无菌pbs溶解后加入外泌体提取液进行孵育，孵育后得第二孵化液，将第二孵化液进行离心收集底部沉淀，得细胞外泌体。

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问纸层析定性糖类物质，显色剂里的硝酸银的水丙酮饱和溶液，加多少硝酸银啊？配方:AgNO3的水丙酮饱和溶液，V水:V丙酮=1:200

天一湖医者

硝酸银O.1g溶于水lml，加2-苯氧基乙醇lOOml，用丙酮稀释至200ml，

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问关于细胞凋亡的流式细胞术

天一湖医者

流式图有很多种，最常用的是流式直方图和流式散点图，还有流式等高线图。流式直方图只能显示一个通道的信息，流式散点图和流式等高线图可以同时显示2个通道的信息。　　流式通道　　散射光通道　　散射光通道有两个，包括FSC通道和SSC通道，一般所有的流式细胞仪均有这2个散射光通道；　　FSC，即前向角散射，它的值代表细胞的大小。细胞体积越大，其FSC值就越大。所以可以利用细胞的FSC值初步比较细胞的

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问sashimi plot 图怎么看呢，图里的线线上的数字以及不同的线连接，这些都是啥意思呢，整不明白了

天一湖医者

IncLevel1可被认作是exon inclusion level（ψ），是Exon Inclusion Isoform在总（Exon Inclusion Isoform + Exon Skipping Isoform）所占比例I 是指mapping到exon inclusion isoform上的reads数，对应结果表格中的IC_SAMPLE_1S 是指mapping到exon skippi

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问药物作用于癌细胞，Bax蛋白表达降低，是否能说明不是通过凋亡而导致细胞死亡？

bamboopiggy

你不能只检测Bax啊，把bcl2还有caspase3检测一下再说，还要加个rescue的实验

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问从细菌中提取酶，用常规的方法总是拿不到我要的蛋白。是不是也可以加点甘油或者PEG来提取?

天一湖医者

常规方法不行的话，加甘油也不一定有作用，可以试试不同ph

3 回答419 围观

问HPLC是用来分析检测or分离纯化?

一个小哭包

HPLC用来分析检测，。分离纯化都是可以的。HPLC的应用范围十分广泛，对样品的适用性广，不受分析对象挥发性和热稳定性的限制，几乎所有的化合物包括高沸点、极性、离子型化合物和大分子物质均可用高效液相色谱法分析测定，因而弥补了气相色谱法的不足。在目前已知的有机化合物中，可用气相色谱分析的约占20% ，而80% 则需用高效液相色谱来分析。

3 回答838 围观

问从细菌中提取酶，用常规的方法(超声波破壁)，总是拿不到我要的蛋白。是不是这种蛋白也是疏岁水性较强，需要加助溶剂才能提取？

天一湖医者

也可以加点甘油或者PEG来提取，但不一定会有作用。

3 回答325 围观

问蛋白17kd左右，能跟肝素亲和，现在用聚乙二醇修饰它，分子量增加5000左右，请问修饰后怎么分开修饰的和未修饰的呢？

天一湖医者

可以用凝胶色谱纯化的方法试试。

2 回答481 围观

问标签蛋白易洗脱，怎么查找原因？

天一湖医者

填料有问题，换填料。PH、离子强度是否合适，平衡缓冲液是否应与样品缓冲液 pH、离子强度相同。

3 回答569 围观

问蛋白挂在阳离子交换柱上洗脱不下来，怎么办？

天一湖医者

加甘油/蔗糖：增加溶液粘度，降低蛋白之间碰撞几率，从而降低聚合概率降低孵育时间：减少蛋白和填料的结合时间。

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问若转膜不完全时，下一步该怎么办？

bamboopiggy

换转膜的三明治夹子，结果不可信，没有继续往下做的必要了，当然，看看抗体是不是能用，也是可以的。

2 回答519 围观

问如果上样量超载了怎么办？

bamboopiggy

wb上样多了的话，尝试用strip buffer洗洗，或者是降低一抗，二抗的浓度。

3 回答565 围观

问做 200kd 以上蛋白的 Western Blot 时注意事项？

bamboopiggy

用8%的胶，甚至可以用6%的胶，转膜时间要相对延长，买分子量差不多的marker，看转膜是否转过去了。

3 回答972 围观

问蛋白的上样量要怎样根据实验的要求来确定？

bamboopiggy

一般你跑wb的话，40ug/ul就足够了，如果你要跑考染的，也可以用40ul的，但是银染，你只需要用1/6的量就可以了。

3 回答1852 围观

问为什么浓缩胶和分离胶的电压不一致？同样的电压可以吗？

bamboopiggy

可以一样的电压，电压不一样，是想在浓缩胶中，将蛋白压成一条线，所以想让蛋白走的慢，在分离胶中，是为了把条带分开，这时候用低电压，其实也是可以的，就是时间太长。

4 回答5278 围观

问转膜时何为湿法，何为半干法？

bamboopiggy

湿转法就是转膜的时候，膜胶等都是泡在转膜液中的，半干转，是做三明治夹心的时候，用转膜液赶走气泡等，然后直接加入电转仪，不用加电转液，两个方法都好用。

3 回答1440 围观

问Transwell实验上下层培养基为什么不会相互扩散？

bamboopiggy

上下层的培养基会扩散的，但是还是有血清的浓度梯度存在的，well内的细胞在无血清的培养基中，会向浓度高的有血清的培养基中爬，尤其是带ECM胶的。

2 回答1203 围观

问细菌的SERS成像怎么做呢？

bamboopiggy

用3-巯基苯硼酸预标记细菌细胞，使其与金纳米粒子络合。对表面增强拉曼光谱进行整体整理，以生成细菌种群的全景化学图像。该方法已成功地用于研究大量细菌种群在选定植物组织上和组织中的分布。这项研究表明，SERS成像在研究复杂基质中的细菌细胞方面具有巨大潜力，在某些方面优于电子显微镜和荧光显微镜。链接： https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/33592747

1 回答207 围观

问求常用的产生物膜的细菌菌种？

一个小哭包

目前，对生物膜研究最多的是表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌等

3 回答1034 围观

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