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科研学霸天团，48小时有问必答

问重组人rac1蛋白检测生物活性方法

丁香粉猪猪

仅供参考可以看看这个，学习一下

1 回答421 围观

问用新的镍珠纯化蛋白，目的蛋白为什么挂不上珠？

天一湖医者

1. 因为 His标签被包到了蛋白三维结构里面。镍介质无法接触His 标签；2. 纯化工艺不利于结合作用发挥，例如咪唑；3. 蛋白不稳定，标签掉落

2 回答4221 围观

问WB时怎么选择合适的内参蛋白呀

迟C迟

（1）根据样本的种属来源选择，如哺乳动物或者植物等（2）考虑目的蛋白的分子量大小，一般需要与目的蛋白的分子量相差5kd以上（3）根据蛋白表达位置选择不同的内参，不同的细胞器中选择的内参也不同

3 回答288 围观

问WB结果中，目的条带后面为什么有细细的条带？

未来9

可能是样品溶解不好，或存在一定程度的蛋白降解

4 回答518 围观

问请问在做bifc时，如何确定荧光发出的原因，是因为两个蛋白间相互作用，而不是因为两个蛋白浓度过高物理靠近发出的，如何界定这个浓度

天一湖医者

本实验需要设置阴性对照。即用pIB-YN155和pIB-nVC156 (VC156的N端带有atg，可以单独表VC156蛋白)。利用荧光显微镜观察时，需要调节荧光强度，在阴性对照组无荧光信号的情况下，观察实验组的荧光信号。

1 回答659 围观

问蛋白质和脂质互作都有什么实验可以验证？

dxywode

如果你搜“PIP Strips”，就会发现，它是脂质与蛋白质相互作用的研究神器。Echelon专攻各种抗体、分析检测试剂盒、抑制剂等科研领域，尤其擅长以细胞信号、脂类代谢和标记物研究为主。为研究治疗诸如癌症、糖尿病、炎症、感染和心脑血管疾病专家提供了有效的科研工具。PIP条带是2 x 6 cm的疏水膜，其上有100 pmol的八种磷脂酰肌醇和七种其他重要的生物脂质。它们用于在简单的蛋白质-脂质叠加

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问线虫寿命曲线应该如何制作

府宅

秀丽线虫进入成虫期开始产卵后，每天将秀丽线虫转移至新的培养基上。待10d后每天记录秀丽线虫的存活、死亡和丢失的数量。死亡判定标准为铂金丝轻轻碰触秀丽线虫半分钟不动则为死亡；当秀丽线虫在培养皿壁上干、体内有子代孵化导致死亡的排除在外不计入死亡数内。收集每日数据，绘制寿命曲线

3 回答2930 围观

问本人纯化his标签蛋白，无论如何更换表达感受态和诱导条件，蛋白表达量都很低是什么原因？使用载体为32a，和28a都不理想

天一湖医者

a可能原因：超声功率不合适(太大，蛋白碳化，太小，蛋白没完全释放)解决方法：改变超声功率或者其它方法破碎细胞。b.样品或缓冲液不合适解决方法：确保缓冲液中螯合剂，还原剂，咪唑浓度不是很高。c.His标签暴露不完全解决方法：在缓冲液中加变性剂(4-8M尿素，4-6M盐酸胍)，然后用IMAC介质纯化。d.His标签丢失解决方法：必要时增加His的个数并确保正确表达，同时降低上样速度，确保足够的孵育时间

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问常用的蛋白纯化标签有什么特点？如何选择？

未来9

蛋白标签大体可分为三大类：遗传标签、in vivo标签和in vitro标签，最为常用的是遗传标签，即c-Myc、FLAG等。通过将目的基因克隆到含有标签的载体上，方便在下游通过抗体、荧光检测蛋白，或对蛋白进行纯化如何选择：1. 首先需要确定融合标签的目的，蛋白纯化首选His-Tag，Western blot首选Flag-Tag，免疫共沉淀可选择Flag-Tag或其他常用标签如HA、cMyc，活细

3 回答1449 围观

问蛋白质提取纯化实验中，第一步在原材料中加缓冲盐溶液体积如何确定？提取环境温度设在多少合适？

万千490

稀盐和缓冲系统的水溶液对蛋白质稳定性好、溶解度大、是提取蛋白质最常用的溶剂，通常用量是原材料体积的1-5倍，提取时需要均匀的搅拌，以利于蛋白质的溶解。提取的温度要视有效成份性质而定。一方面，多数蛋白质的溶解度随着温度的升高而增大，因此，温度高利于溶解，缩短提取时间。但另一方面，温度升高会使蛋白质变性失活，因此，基于这一点考虑提取蛋白质和酶时一般采用低温（5度以下）操作。为了避免蛋白质提取过程中的降

2 回答391 围观

问请问果汁有机酸含量测定这个实验怎么做？

迟C迟

请参考GB 5009.157-2016，食品中有机酸含量测定有详细步骤。

3 回答557 围观

问提高细胞支架材料的粘度性方式有哪些？

dxy_gwrp7ndq

最适合细胞粘附、增殖的材料表面应为中等湿润。运用等离子体表面改性技术，在高度疏水的P3/4HB 支架表面引入-OH、-COOH等基团，将材料表面的湿润度改善为中度亲水，为促进细胞的粘附创造了有利条件。

3 回答551 围观

问外泌体的生物记物是什么？

bamboopiggy

1.电镜检测：茶托型或一侧凹陷的半球形2.Western blot分子标志物检测：外泌体标志蛋白包括四跨膜蛋白家族，如CD9、CD63和CD81；细胞质蛋白，如肌动蛋白（Actin）和钙磷脂结合蛋白（Annexins）；参与生物功能的分子，如凋亡转接基因2互作蛋白X（ALIX）、肿瘤易感基因101蛋白（TSG101）、热休克蛋白（HSP70、HSP90），以及细胞分泌的特异性蛋白

3 回答1215 围观

问白色脂肪组织是由于那些因子而可以转化为棕色脂肪组织的呢

bamboopiggy

FGF21、PGC-1α、UCP1、PRDM16、ATGL、AMPK、PPARγ、脂连素等，都会促进白色脂肪棕色化。你可以直接找个综述来看看。

3 回答556 围观

问请问大家都是怎么做小分子抑制剂找通路或者靶点的？最佳使用浓度怎么确定？

bamboopiggy

现在可以通过买一些公司的药物库，直接高通量筛选，有用的小分子药物。一般是高通量10um的药物浓度，筛出有用的小分子化合物以后。再扩大浓度梯度，找到合适的浓度，至于小分子药对应的靶点，一般文献里，或公司给的说明书里会有，selleck应该就有这样的药物库

4 回答912 围观

问Qupath软件的使用方法？

bamboopiggy

我没有用过这个软件，但是看你提了，我好奇是个什么软件，原始链接在这里，你可以直接点链接去看看：https://blog.csdn.net/qq_40662074/article/details/104968297这个帖子包含了以下内容：软件安装软件下载软件安装【windows版】简单使用文件打开人工标注标注导出和导入几个重要的官方说明书

3 回答3400 围观

问病毒反向遗传操作的比例是如何确定的？

dxywode

RNA病毒的反向遗传学操作是指由病毒的cDNA克隆获取RNA病毒的一项技术,该技术通过人为加入的DNA环节,实现了在DNA水平上对RNA 病毒基因组的人工操作,在深入阐明病毒基因组结构与功能、发展新型病毒载体,尤其在研制筛选候选疫苗株等方面有很好的应用前景.用PBS液洗3次，按照1:6比例。

1 回答431 围观

问以EDC和NHS做催化剂，TPGS-COOH和4-NH2－Tempo为原料，二者发生酰胺反应。

丁香粉猪猪

ph值4缓冲液体中，反应48小时室温

3 回答1010 围观

问病毒感染和CRP的关系是什么，降低是不是就算愈后良好？

府宅

在病毒感染时，没有显著提高，通常≤50mg/L，如果 CRP 值显著下降，证明疗效良好。

4 回答554 围观

问导致实时荧光定量 PCR 效率低有哪些原因？

dxy_gwrp7ndq

1. PCR反应性能差。引物、试剂、PCR条件的再摸索。优化反应条件，或者重新设计PCR引物。2. PCR阻害物质的混入。模板提取方法的再摸索。3. 标准品稀释不准确。使用专用标准品稀释Buffer。

4 回答1200 围观

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