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中华人民共和国国务院令第727号《化妆品监督管理条例》在2020年1月3日国务院第77次常务会议通过，自2021年1月1日起施行。《化妆品监督管理条例》中第七十七条规定：牙膏参照本条例有关普通化妆品的规定进行管理。根据法规要求，是不是意味着牙膏成为了化妆品呢？在2021年1月14日国家药监局召开的化妆品监管条例实施新闻吹风会上，国家药监局化妆品监管司副司长戚柳彬对“牙膏参照有关普通化妆品的规定进行管理是基于什么考虑”这个问题进行了回答。其中提到牙膏在原料管理、标签管理上有区别于普通化妆品的独特之处，因此条例规定是“参照”而不是“按照”普通化妆品进行管理。下一步，国家药监局将按照条例规定要求，充分尊重牙膏监管的自身规律，在考虑行业发展现状、历史沿革的前提下，严格落实“四个最严”要求，推进相关配套规章和规范性文件的起草工作。国家药监局化妆品监管司为贯彻落实《化妆品监督管理条例》，组织起草了《牙膏备案资料规范》（征求意见稿），向社会公开征求意见并于2021年1月5日发布了关于公开征求《牙膏备案资料规范》法规文件意见的函。征求意见稿中对牙膏备案提交资料和备案检验要求进行了明确规定。2021年1

本人现在正在做线栓法大鼠大脑中动脉阻断实验（MCAO模型），这方面的资料我查了一些，这个实验我也作了一段时间，不敢说很专业了，不过现在基本上我能在15min左右完成手术，而且手术过程中不出一滴血，造模后缺血程度基本一致。虽然前面有很多前辈发了很多MCAO的很专业的贴子，不过我觉得比较凌乱，现在我把我的心得体会和以前的贴子的精华部分奉献给大家，希望这会对将要做这个实验的朋友有一丝的帮助。虽然做实验总会有郁闷的时候，不过风雨之后总会见到彩虹的，这可以也是我的心得体会。衷心祝福大家能把实验做的成功、完美！ 实验前准备 麻醉剂：水合氯醛（应较好的控制大鼠体温） 保温：60W白炙灯高度为37cm直接照射能使肛温保持在 37℃ 栓线的制备：1.取熔点为56℃的固体石蜡一块，在瓷杯中加热熔化。直径为o．24mm、长5cm的鱼线一端5mm长的一段，垂直在熔化的石蜡中迅速浸入并提起，立即凝固的一薄层石蜡可牢固地粘附在鱼线一端的表面，其直径为0.26mm。就这样，普通的鱼线即可变成规相一致头端光滑圆钝的栓线。 2.在鱼线18mm的位置用涂改液标记一个白色点。 TTC的配制：用0.2mol/L磷酸缓冲液（P

糖尿病（diabetes mellitus ，DM）已成为严重危害人类健康的公共卫生问题。DM 及其并发症不仅严重影响糖尿病患者的生活质量，同时也是致残、致死的重要原因。因此，建立合适的糖尿病动物模型，阐明 DM 及其并发症的发病机制就显得尤为重要。目前，DM 动物模型制备方法主要有：手术切除胰腺、化学药物诱导、自发性糖尿病动物模型、转基因动物等。 一、切除胰腺的 DM 模型常采用狗、猫和大鼠等造模，全部或大部分切除实验动物的胰腺，但保存胰十二指肠动脉吻合弓。如果连续两天血糖值超过 11.1mmol／Ｌ或者葡萄糖耐量试验 120min 时的血糖值仍未恢复到注射前水平则认为 DM 造模成功。其机制是全部或大部分切除胰腺后,β细胞缺失而产生永久性 DM。 二、化学药物诱发的 DM 模型采用链脲佐菌素腹腔注射或四氧嘧啶静脉注射可诱发 DM，常用动物有小鼠、大鼠、家兔和狗。链脲佐菌素（streptozotocin STZ）的参考剂量为 50～150mg／kg；四氧嘧啶（alloxan）的参考剂量为 60～110mg／kg。STZ 是一种含亚硝基的化合物，进入体内可通过以下机制特异性地破坏胰岛β

肿瘤模型我们一般常用的就是小鼠模型和人肿瘤裸小鼠移植瘤模型。其中用得最多的是皮下模型，另外还有腹水（或者尾静脉注射）以及原位模型，其他的模型很少用，就不提他们了。小鼠模型分三大类：第一类是以 S180、EAC、H22 等为代表的，他们的宿主小鼠多选用 KM，可产生腹水，也可在皮下成瘤。多以腹水传代，实验时抽取腹水，经过一定稀释后皮下接种构建模型，接踵后第二天开始给药，给药 7 到 10 天，接种 10 天后结束试验，剥取肿瘤称瘤重。 1. 关于构建瘤种可以用体外细胞株培养后，用 PBS 悬浮至 1~3×106/0.1ml/mouse，i.p 接种即可，最好用 6 号左右的针头，就是常用的 2ml 一次性注射的针头。 2. 关于腹水传代观察到第一代的种鼠肚子较大后（一般约 8~9 天左右），可以传代，传代时取 1ml 注射器，用 2ml 注射器的针头，种鼠腹部消毒后直接将针头插入抽取腹水即可，注意不要把针头插得很深，尽量浅一点，还可以把老鼠拎起来，利用重力，让腹水集中在某处便于抽取，一般抽个 0.5ml 就可以了，不用离心。直接用 PBS 3~6 倍稀释后，接种到新的老鼠腹腔，腹水颜色为

裸鼠肿瘤接种一般有细胞接种和瘤块接种两种方式，接种取材有手术活检标本、癌性胸腹水标本和体外培养的细胞系三种。楼主看来是做体外培养的细胞的裸鼠接种，一般用带 6 号针头的注射器取适量细胞悬液注射于裸鼠的皮下，部位看试验要求而定，一般在腋下或背部皮下，每个接种部位注射 0.1-0.2 ml。就是将培养的细胞收集起来调整到适宜浓度重悬于不含血清的培养液或 PBS 中，放于冰盒中携至动物房，直接注射即可。是牵涉到细胞株的成瘤性问题，可以通过增大细胞悬液浓度的办法来解决。一般细胞浓度可在 undefined10 的 6 次方到 undefined10 的 7 次方之间，浓度再大就可能打不进去了。具体浓度需要查相关文献。如果成瘤率太低，可以通过把瘤块在裸鼠身上传 2—3 代的方法提高成瘤率，即将已成瘤鼠的瘤块取出接种于新鼠身上，成瘤后再取出接种新鼠，如此传几代，肿瘤性质稳定后，再将肿瘤取出，剪碎、研磨、匀浆成为细胞悬液后再接种。 一、可移植性肿瘤的建立方法腹水瘤的建立将动物实体瘤细胞注入受体动物腹腔内，或将实体疤移植于受体动物的腹壁内，肿瘤生长后引起腹水，腹水内含高大量瘤细胞可移植传代即为腹水瘤。建议腹水瘤初期、腹水往往是血

一、大鼠灌胃 大鼠灌胃是最常见的给药方法之一。灌胃所用的针头可以从市场上购买，操作方法和小鼠灌胃大同小异，只是由于大鼠体积较大，抓大鼠的手法和小鼠有所不同。 大鼠灌胃是在清醒状态下进行的，不需要麻醉。大鼠的灌胃针长约6～8cm，直径约1.2mm。 大鼠灌胃时，右手持灌胃注射器，左手拇指和食中二指相对，抓住大鼠颈部皮肤，使大鼠的头部和颈部及躯干呈一直线，不需要固定大鼠的尾巴，就可以实施灌胃操作了，其余的操作均和小鼠一样。 大鼠一般灌胃量为1ml/100g体重，因此一般大鼠灌入2ml是可以的。大鼠的灌胃给药体积一般为5～10ml/kg。但是药物的浓度是需要自己按照动物实验方法学的方法进行换算：200g大鼠对应70kg人的折算系数为0.018。 二、大鼠腹腔注射 腹腔注射是常见的给药方式，尤其是在麻醉时。常见的麻醉方法均是麻醉药物腹腔注射。 大鼠腹腔注射的方法和小鼠基本相同。 1.大鼠腹腔注射可以用5ml的注射器，配合5.5～7号针头。 2.腹腔注射时右手持注射器，左手的小指和无名指抓住大鼠的尾巴，另外三个手指抓住大鼠的颈部，使大鼠的头部向下。这样腹腔中的器官就会自然倒向胸部，防止注射器刺入

一、SD大鼠的麻醉 1、SD大鼠腹腔麻醉 把异氟烷和脂肪乳混合做成乳化异氟烷，腹腔注射，3分钟麻醉，30分钟清醒。 乳化异氟烷制备：用30%的脂肪乳为载体，在室温下（20℃）应用玻璃瓶法，配制成8%的乳化异氟烷。即将1.2ml的液态异氟烷和21.3ml的30%脂肪乳加入至一个气密性良好的25～30ml玻璃容器内，在振荡器上以2000r/min的速度剧烈震荡30s，静置30s，然后再以2000r/min速度剧烈震荡50min，达到平衡后放置于4℃冰箱保存备用。 乳化异氟烷，大鼠腹腔注射的半数有效量（ED50）相当于液态异氟烷0.51～0.64ml/kg，半数致死量（LD50）相当于液态异氟烷1.10～1.46ml/kg，治疗指数（TI）为2.24。致死量大鼠表现为呼吸抑制、心律失常，继而心跳停止。病理解剖显示腹腔注射乳化异氟烷不会引起心、肺、肝、肠系膜的病理改变。 2、SD大鼠吸入麻醉 可以作一个小金鱼缸 （四方形） 算出体积，钻个眼用橡皮塞塞住，老鼠装进去封住缸口，从橡皮塞插上注射器给液态吸入麻醉药（如1ml异氟烷可挥发成196ml的气体），算出需要的浓度就会算出需要的液态麻醉药量，一

小鼠灌胃方法比较简单，需要关注的只有两点：一是要保持小鼠的头部和颈部成一直线，方便灌胃针头进入，二是动作要轻柔，从口角进入，防止损失食道。做的多了自然就熟练了。具体操作过程如下：1. 准备灌胃针头。一般可以从市场上面买到，实在没有的话，可以用12号的针头，剪去针尖，用砂纸将头端磨平，也可以用。但是买的灌胃针头的头端用锡或者适宜的方法处理了针头的锐口，自己用砂纸不可能将所有的锐口都磨掉，用这样的针头灌胃，损失小鼠食道的可能性比较大。2. 抓住小鼠，使其头、颈和身体呈一直线。抓小鼠的动作很简单，左手的小指和无名指抓住小鼠的尾巴，另外三个手指抓住小鼠的颈部即可。因为小鼠始终在活动中，若一次抓的感觉不是很顺手，要放开重新抓，不要逞强进行下一步操作。3. 抓好小鼠就可以灌胃了，一般用1 ml的注射器配灌胃针头。灌胃针头从小鼠的嘴角进入，压住舌头，抵住上颚，轻轻向内推进，进入食管后会有一个刺空感，进入食道后就可以推注药液了。（我认为，所谓的灌胃，不必要灌胃针头进入小鼠的胃部，进入食管后就可以推药了，这样对小鼠食道的损伤要小点，特别是要长期灌胃给药的情况下。）当然，灌胃针头也可以再往里面深入一点，防

灌注固定主要用于神经系统，其他组织意义不是很大，而且耗时耗力。对神经系统防止变性效果较好！一、小鼠灌注灌流固定小鼠时我一般采用输液器的针头(4 号半，这样肉眼可见就是肺部明显充气胀大变白，针头要从心轴方向进针，刺入心尖 3~4 毫米左右就可以了，开始灌流后剪破右心耳，约 40 毫升生理盐水，后再灌流约 20 毫升多聚甲醛，整个灌流固定的过程就完成了。二、大鼠灌注按大鼠体重，用 2% 戊巴比妥钠（0.25ml/100g）进行腹腔注射麻醉，开胸暴露心脏，向左心室内注射 1% 肝素钠 0.2ml 后经左心室行主动脉插管， 血管钳固定后剪开右心耳，先以生理盐水 150ml 快速冲洗血管，然后用4%多聚甲醛的 0.01mol/LPBS（4℃，PH7.40）250ml 灌注固定，先快后慢，共需时间为 50min，之后取材，置4%多聚甲醛固定液后固定，在 4℃ 冰箱内保存。多聚甲醛进入大鼠体内，大鼠会出现四肢、尾的抽搐，最终以肝脏发白、内脏鼓起即灌注好。三、脑组织免疫组化实验1. 灌注固定用的针头，一般都用注射针头。灌注大鼠一般可用10到12号针头，小鼠可用 6、7 号针头，但很重要的一点是要把针头

一、技术背景： Adeasy 系统利用了腺病毒具有的高感染能力，可高度浓缩等优点，并破坏了腺病毒基因组中的早期基因E1，使之成为较为安全、高效的病毒载体。利用带有E1 基因的293 细胞作为包装细胞，通过倍比扩增，富集病毒颗粒，并通过CsCl 梯度离心，透析进行分离纯化。对绝大多数的细胞株可以达到近乎100％的感染效率。但需要指出的是Adeasy 同样具有所有病毒载体或转染试剂都不可避免的细胞毒性问题。 二、所需试剂：1. 293 细胞；2. 重组好的腺病毒质粒；3. Pac I 限制性内切酶；4. 质粒回收相关试剂；5. 细胞培养、转染相关试剂；6. TBS：10mM Tris, 0.9% NaCl，pH8.1；7. 40% CsCl：28.45 g CsCl 溶于42.7 ml 的TBS 中，4 度保存；8. 15% CsCl：9.085 g CsCl 溶于47.69 ml 的TBS 中，4 度保存；9. Beckman 离心管：1undefined89 mm，SW41 转头；10. Polybrene (sigma)，10 mg/ml；11. 透析袋：Spectrum Co. （成卷供应，带少

一、慢病毒的储存与稀释：1. 病毒的储存：用户收到病毒液后在很短时间内即使用慢病毒进行实验，可以将病毒暂时放置于4 ℃保存；如需长期保存请放置于-80℃（病毒置于冻存管，并使用封口膜封口）注：A．病毒可以存放于-80℃ 6个月以上；但如果病毒储存时间超过6个月，我们建议在使用前需要重新滴定病毒滴度。B．反复冻融会降低病毒滴度：每次冻融会降低病毒滴度10%；因此在病毒使用过程中应尽量避免反复冻融，为避免反复冻融我们强烈建议客户收到病毒后按照每次的使用量进行分装。2. 病毒的稀释：用户需要稀释病毒时，请将病毒取出置于冰浴融解后，使用培养目的细胞用PBS或无血清培养基(含血清或含双抗不影响病毒感染)混匀分装后4℃保存(请尽量在三天内用完)，分装后使用。二、慢病毒用于体外（in vitro）实验：感染培养原代细胞和建系细胞1. 慢病毒对各种细胞和组织的亲嗜性不同，用户使用Invabio提供的慢病毒之前可以通过查阅相关文献，了解慢病毒对您的目的细胞的亲嗜性，感染复数（MOI 值）以及在体内（in vivo）注射所需要的病毒量。如果没有相关文献支持，可以通过感染预实验得到合适的感染复数（MOI 值

1 适用范围 本标准规定了禽流感的血凝试验、血凝抑制试验。 本标准适用于禽流感抗体的检测（主要适用于血清样品）。 2 血凝试验 2.1 材料与试剂 2.1.1 器材：普通天平、分析天平、普通离心机、微型振荡器、注射器、冰箱、高压灭菌器、微量移液器及96孔V形血凝反应板。 2.2.2 pH7.2磷酸盐缓冲液(PBS)，配制方法参见附录A。 2.2.3 1%鸡红细胞悬液，配制方法参见附录B。 2.2.4 阿氏液，配制方法参见附录C。 2.2.5 标准禽流感病毒抗原，购入的标准禽流感病毒应检测其血凝效价并进行无菌检验，以检查与所标HA效价是否相符。若不符，应重复检测并到相关实验室验证。2.2 操作程序 A. 取96孔V形微量反应板，用微量移液器在1~12孔每孔加25 μL PBS，共滴8排，后四排的第1列孔再补加25 μL PBS。 B. 吸取25 μL标准禽流感抗原加入到第1列孔中，吹打3~5次充分混匀。 C. 从第1列孔吸取25 μL混匀后的抗原液加到第2列孔中，混匀后吸取25μL加入到第3列孔中，依次进行系列倍比稀释至第11列孔，最后从第11列孔各吸取25 μL弃之，设第12列孔为红细

一、慢病毒包装简介及其用途慢病毒（ Lentivirus ）载体是以 HIV-1 （人类免疫缺陷 I 型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。慢病毒载体的研究发展得很快，研究的也非常深入。该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达。在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，从而达到良好的的基因治疗效果，在美国已经开展了临床研究，效果非常理想，因此具有广阔的应用前景。目前慢病毒也被广泛地应用于表达 RNAi 的研究中。由于有些类型细胞脂质体转染效果差，转移到细胞内的 siRNA 半衰期短，体外合成 siRNA 对基因表达的抑制作用通常是短暂的，因而使其应用受到较大的限制。采用事先在体外构建能够表达 siRNA 的载体，然后转移到细胞内转录 siRNA 的策略，不但使脂质体有效转染的细胞种类增加，而且对基因表达抑制效果也不逊色于体外合成 siRNA ，在长期稳定表达载体的细胞中，甚至可以发挥长期阻断基因表达的作用。在所构建的 siRNA 表达载体中

目的与原理 了解各种类型白细胞的形态特征，掌握血涂片制作方法和白细胞分类计数方法，进行不同鱼类白细胞分类计数和血细胞形态特征、变形率等的观察。 白细胞依据其形状、染色颗粒、细胞质和细胞核的形状大小可以进行分类。通常的分类方法是根据细胞浆中有无特殊的嗜色颗粒，将其分成颗粒细胞和无颗粒细胞。颗粒细胞又依据所含颗粒对染色剂反应特性，被区分为中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞；无颗粒细胞则分成单核细胞和淋巴细胞。中性粒细胞有较强的吞噬能力，能将侵入机体的微生物消灭掉，并可参与免疫复合物和坏死组织的清除工作。嗜酸性粒细胞的细胞内含有过氧化物酶和酸性磷酸酶，吞噬能力与中性粒细胞相当或稍弱，能吞噬抗原-抗体复合物，此外，嗜酸性粒细胞具有抗炎作用。嗜碱性粒细胞含有多种化学物质，如组织胺、肝素和5-羟色胺等，当抗原-抗体发生反应时，或机体在寒冷环境中时，都能引起嗜碱性粒细胞释放组织胺和肝素。血液中的单核细胞穿出血管壁进入组织，变成巨噬细胞，可对抗组织内的致病物，各种细菌和病毒。淋巴细胞有免疫功能，对异己构型的物质具有杀灭和消除作用。 各种白细胞必须经过染色，才易于区分其类别。常用者为瑞氏（Wrigh

血细胞计数器（也被拼写血球计数仪）是一种蚀刻玻璃室提出双方将举行石英盖玻片完全室地板0.1毫米以上。为9毫米2的总表面积的计数室中进行蚀刻。 图1、 血细胞计数器的尺寸。 浓度的计算是根据上下方的盖玻片的体积。一个大广场（参见图2中的W）拥有量为0.0001毫升（长x宽x高，也就是说，0.1厘米×0.1厘米×0.01厘米）。 在这两种方法中，通过毛细管作用填充血细胞计数器 - 放置填充的吸移管具有良好的悬吊在血细胞计数器的边缘的凹口的细胞混合，然后慢慢地排出一些内容，以便通过毛细作用进入腔室fluidis绘制。 染色的细胞往往有利于可视化和计数。无论是混合细胞用台盼蓝（trypan blue）等体积的[0.4%（重量/体积）tyrypan蓝色在PBS]来确定活/死计数（死细胞是蓝色的），或杀死细胞，用10%福尔马林，然后染色用台盼蓝（trypan blue）或其他染色（以提高所有单元格的可视化。 这里有两个简单的方法，用于计数的基础上用于确定细胞计数的血细胞计数器的表面面积的细胞。其他的计数计划accetable的的。方法的选择取决于细胞浓度 - 该程序的准确性取决于计数细胞

细胞培养技术中，细胞计数是一项基本功，对于标准化培养条件以及需要精确定量的实验来说都非常关键。这里介绍使用血细胞计数器对细胞进行计数的经典方法以及中间一些需要注意的细节。制备细胞悬液：对于贴壁生长的细胞，我们需要首先使用胰酶消化的方法使细胞从培养皿表面脱落根据需要加入合适体积的培养基，将细胞进行中和及稀释，以得到均质的细胞悬液。要求尽可能将细胞吹打散开，不要残留任何细胞团准备血细胞计数器：使用70%乙醇将盖玻片和血细胞计数器清洁干净将将盖玻片润湿（使用水或呼一口气，目的是使盖玻片与血细胞计数器接触更紧密，易于粘连），并覆盖至血细胞计数器上台盼兰染色（可选）：如果需要计算细胞的活力，则需要将细胞悬液和0.4%台盼兰等体积混合室温孵育3-5分钟，使台盼兰完全进入死细胞，使死细胞着蓝色血细胞计数器加样：使用吸管将细胞悬液或细胞/台盼兰混合液滴加到血细胞计数器计数池的边缘。此时液滴将在虹吸的作用下进入盖玻片下方的计数池以同样的方式在另一侧的计数池中也加入细胞悬液将计数板放置几分钟使细胞完全扩散，同时用吸水纸吸除多余的液体细胞计数：在100倍显微镜下，移动计数板将视野对准计数板的中央大方块，该方

实验目的 掌握细胞计数的方法。 了解区分细胞存活状态的方法。实验用品 0.4%台盼蓝溶液、无水乙醇或95%乙醇溶液、脱脂棉 普通显微镜、试管、吸管、毛细吸管、细胞计数板、绸布。实验原理 在细胞培养工作中，常需要了解细胞生活状态和鉴别细胞死活，确定细胞接种浓度和数量以及了解细胞存活率和增殖度，如用酶消化制备的细胞悬液中细胞活力的鉴别，冻存细胞复苏后的活力检测等。细胞悬液制备后，常用活体染料台盼蓝对细胞进行染色，进行细胞计数。台盼蓝不能透过活细胞正常完整的细胞膜，故活细胞不着色。而死亡细胞的细胞膜通透性增高，可使染料进入细胞内而使细胞着色（蓝色）。细胞计数一般用血细胞计数板，按白细胞计数方法进行计数，便于确定细胞的生活状况。 实验内容与方法 （一）制备动物细胞悬液 将动物细胞用生物盐水制备成适当浓度的细胞悬液备用。 （二）细胞计数 1. 计数板处理 用无水乙醇或95%乙醇溶液擦拭计数板后，用绸布擦净，另擦净盖玻片一张，把盖片覆在计数板上面。 2. 染色 用滴管吸取0.4%台盼蓝染液，按1∶1比例加入细胞悬液中。从计数板边缘缓缓滴入，使之充满计数板和盖片之间的空隙中。注意不要使液

将克隆化基因插入合适载体后导入大肠杆菌用于表达大量蛋白质的方法一般称为原核表达。这种方法在蛋白纯化、定位及功能分析等方面都有应用。大肠杆菌用于表达重组蛋白有以下特点： 易于生长和控制；用于细菌培养的材料不及哺乳动物细胞系统的材料昂贵；有各种各样的大肠杆菌菌株及与之匹配的具各种特性的质粒可供选择。但是，在大肠杆菌中表达的蛋白由于缺少修饰和糖基化、磷酸化等翻译后加工，常形成包涵体而影响表达蛋白的生物学活性及构象。 表达载体在基因工程中具有十分重要的作用，原核表达载体通常为质粒，典型的表达载体应具有以下几种元件： （1）选择标志的编码序列； （2）可控转录的启动子； （3）转录调控序列(转录终止子，核糖体结合位点)； （4）一个多限制酶切位点接头； （5）宿主体内自主复制的序列。 原核表达一般程序如下： 获得目的基因－准备表达载体－将目的基因插入表达载体中（测序验证）－转化表达宿主菌－诱导靶蛋白的表达－表达蛋白的分析－扩增、纯化、进一步检测 一、试剂准备 1、LB培养基。 2、100mM IPTG（异丙基硫代-β-D-半乳糖苷）：2.38g IPTG溶于100ml ddH2O中，0.22μm

一、酶免疫组化的关键环节1、标本固定：固定的目的是①防止标本从玻片上脱落；②除去防碍抗原-抗体结合的类脂，使抗原抗体结合物易于获得良好的染色结果；③固定的标本易于保存。2、脱水、石蜡包埋和制片：脱水用梯度乙醇（由低到高）充分脱水、对组织要完全浸蜡、切片时刀片要干净和锋利。否则，容易裂片和脱片等。3、脱蜡和水化：这是为了后面的抗体等试剂能够充分与组织中抗原等结合反应。脱蜡可以先 60 度 20 min，然后立即二甲苯 1-3 分别 10min，但当天制好的切片可以 60 度 3-4h。水化用梯度乙醇（由高到低）。若脱蜡和水化不全易出现局灶性反应和浸洗不全，而产生非特异性背景着色。4、抗原修复：由于组织中部分抗原在甲醛或多聚甲醛固定过程中，发生了蛋白之间交联及醛基的封闭作用，从而失去抗原性；通过抗原修复，使得细胞内抗原决定族重新暴露，提高抗原检测率。常用的修复方法从强到弱一般分为三种，高压修复、微波修复、胰酶修复。修复液也分为若干种（具体的可以查阅相关资料，大量的：中性的、高 pH 的等）。我们实验室一般用微波修复中火 6 miundefined4 次，效果不错。注意微波修复后自然冷却 30 min 左

母种培养基的配制同一种菌类培养基的配方虽然有多种多样，但必须含有各种菌丝生长所需要的养分、水分和适宜的酸碱度。马铃薯、葡萄糖、琼脂作为各类母种的培养基最为普遍，菌丝都能正常生长。现将常用的培养基配方和配制方法举例介绍。1.马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA培养基)马铃薯(去皮)：200g葡萄糖：20g琼脂：20g水：1000mLpH值：自然2.马铃薯蔗糖琼脂培养基(PSA培养基)马铃薯(去皮)：200g蔗糖：20g琼脂：20g水：1000mLpH值：自然以上两种培养基广泛应用于各种菇、耳、猴头类食用菌的培养。其具体制作方法是：将200g马铃薯去皮，去芽眼，切成小条放入铝锅中，加入1000mL水，煮沸20～30分钟左右至马铃薯软而不烂时，用6～8层纱布过滤，取滤汁于锅中，补水至1000mL，加入琼脂熔化，再加入糖搅拌均匀，趁热分装于试管中。