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目的 　研制人C肽（C-peptide）时间分辨免疫荧光分析（TRFIA）试剂盒。方法 　采用双抗体夹心一步法建立C肽TRFIA试剂盒，对试剂盒的各项指标进行评价。结果 　试剂盒的可测范围为0.5～22ng/ml，灵敏度为0.045ng/ml，批内、批间的变异系数（CV）分别为4.1%～6.7%和5.4%～6.8%；与胰岛素无交叉反应，与胰岛素原的交叉反应率为9.0%。30份血样用本试剂盒与国外同类试剂盒同时检测，其相关系数为 0.992。结论 　试剂盒各项指标均达到临床检测要求，可替代国外同类产品试剂盒。

【求助】钙离子的测定 参与者：99shaoshuai 请问各位师兄，师姐，用Fura-2/AM标记，荧光双波长测细胞内钙离子浓度时，悬浮细胞时，悬浮液里含不含Ca2+，Mg2+离子？如果含Ca2+，Mg2+离子的话，会不会影响细胞内钙离子的测定？为什么？非常感谢！ 参与者：yangchunzhang1 AM基团可以特异的标记细胞内游离钙离子，因而不用担心外液的影响。具体机制请参照染料的说明书。 没 ...

【求助】骨髓瘤细胞的体内接种问题 参与者：qj_82 请教各位：骨髓瘤细胞如果要进行乳鼠或者大鼠的体内接种，是采用腹腔注射，还是皮下注射？还是直接注射在脾脏上？细胞密度要达到多少才有比较理想的接种效果？ 参与者：zhangzhanli2008 皮下１１０的７次方－３１０的７次方/ml 腹腔１１０的６次方/ml ...

流式细胞仪主要由以下五部分构成：①流动室及液流驱动系统②激光光源及光束形成系统③光学系统④信号检测与存储、显示、分析系统⑤细胞分选系统。 一、主要技术指标 1．流式细胞仪的分析速度：一般流式细胞仪每秒检测1000～5000个细胞，大型机可达每秒上万个细胞。 2．流式细胞仪的荧光检测灵敏度：一般能测出单个细胞上<600个荧光分子，两个细胞间的荧光差＞5%即可区分。 3．前向角散射（FSC）光检 ...

根据作者E-mail地址，向作者索要。这是一种看似麻烦，实际非常有效的办法。为了更方便大家向作者索取原文，特意写了一份英文信函的模板，您只要把作者姓名、文章标题等等加上就成了。拜托您使用时稍加改动，避免千篇一律。信的内容如下： Dear Mr./Mrs.： ________（作者名） I am a graduate student of NanJing Medical University i ...

【求助】sf9，空斑试验，滴度测定 参与者：xiaoniziwendeng 我用的是bac-to-bac系统表达的目的蛋白。加上荧光底物后，96孔板读数，野生病毒和目的病毒相差不大，而且细胞感染后脱落严重，我该如何做呢？很希望能得到大家的帮助 参与者：yangea 以下问题请参考排除： 1、是挑取的单空斑进行病毒扩增的吗？ 2、荧光底物是否摸索了浓度梯度，即是否找到了作用最为明显的使用浓度； 3、 ...

免疫组织化学又称免疫细胞化学，是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。免疫组织化学的方法有多种，其实都大同小异，不同点只是在于显色基团！ SP法 1）脱蜡、水化； 2）PBS洗2～3次各5分钟； 3）3%H2O2（80%甲醇）滴加在TMA上，室温静置10分钟； 4）PBS洗2～3次各5分钟； 5）抗原修复 ...

【求助】HEK293细胞中是否能查到p53蛋白 参与者：yuncheng1973 请问各位同行，正常的人胚肾HEK293细胞做免疫细胞化学染色是否能测到p53蛋白呢？因为p53蛋白在正常细胞中含量很低，所以担心会测不到，有谁做过可以告诉我吗，谢谢！ 参与者：louise3653 你的问题提得好。 HEK293的详细资料请参看美国ATCC网： http://www.atcc.org/common/c ...

【求助】关于血管生成实验 参与者：erik 想设计一实验研究一蛋白对肿瘤细胞血管生成的影响，但不知道需要几种实验方法同时运用才能说明问题，或者说哪几种是常用的（最好简单易行），我是外行，谢谢指教！ 参与者：viv2005 动脉环，小管生成，鸡胚，这几个比较常用，要么就是直接上动物 参与者：erik 我的意思是同时做哪几个就可以说明问题，呵呵，谢谢您的回复！ 参与者：viv2005 我们都是一起做的 ...

【求助】悬浮细胞的免疫组化 参与者：joveandjuno 各位前辈，我想做悬浮细胞的免疫组化，看帖子说应该滴片，滴完片子怎么做组化呢？ 用不用固定什么的？ 我想要看的抗原在细胞膜上。还有，贴壁细胞做免疫组化的话，观察细胞膜上的抗原，应该用什么固定？ 谢谢～ 参与者：laugh 用多聚赖氨酸包被片子来滴片，滴片后离心，去除多余液体，一般用甲醛或多聚甲醛固定，也可以视情况用其他固定剂如冷的丙酮或乙醇 ...

【求助】谁知道液体闪烁仪的探测下限啊 参与者：joytcm 哪位知道液体闪烁仪的探测下限啊，最小能测多少微居呀，多谢啦 参与者：fishbody 这很难说。不同的仪器对不同的核素的测量效率是不一样的，而且液闪的测量还由闪烁液转换光子能量效率的因素。 另外，液体闪烁仪测量到的是cpm（count per minute），而不是uCi。 一般，0.01uCi甚至更低的放射性量就可以测量的。 参与者：j ...

1、原理 用稀乙酸将血液稀释20倍，使红细胞全部溶解，滴入白细胞计数池中，在显微镜下计数，求得每立方毫米血液中的白细胞数. 2、器材和试剂 2.1器材 生物显微镜、Neubauer氏血细胞计数池、0.02ml吸管、小试管、刺血针、2ml吸管 2.2试剂 白细胞稀释液：采用3%乙酸溶液。 3、稀释液的配制 采用3%乙酸溶液。即取冰乙酸3ml，加蒸馏水至100ml混合。亦可于上述稀释液中加美蓝或龙胆紫 ...

【求助】淋巴细胞分离 参与者：zhangwenli 请教：我现在在做实验，第一步就是取健康人的外周血5ml，分离出里面的淋巴细胞.可是做了好几次都没能把它给分离出来.最后一次，我吸取了白雾状的一层，离心后看不到红色沉淀，结果放在高倍显微镜下一看，绝大部分还是红细胞，里面的淋巴细胞少得可怜.我是按照步骤一步一步的做了，怎么还是把淋巴细胞分离不出来呢?从血中分离淋巴细胞究竟需要注意什么?关键在什么地方 ...

【求助】有没有高人做过细胞-基质粘附实验啊？ 参与者：从天而降的少女 96孔扳上是先铺mtrix gel 再铺FN，还是直接铺FN就可以了呢?滴上去以后风干了就可以吗?还是要等一段时间才可以加细胞悬液?谁告诉我一下啊，多谢.我想检测肿瘤细胞的黏附能力. 有没有高人做过细胞-基质粘附实验啊？ 参与者：sunnyziyang 直接铺FN，超净台内过夜风干，使用前PBS 冲洗2遍，重新水化，再加1%BS ...

【求助】免疫磁珠分选后阳性细胞极少 参与者：fjxm81 今天第一次用MACS磁珠进行胚胎肝细胞阳性分选，我是先将细胞与兔抗鼠一抗孵育，然后再用相应磁珠（羊抗兔磁珠）进行孵育。结果得到的阳性细胞极少无比，从早上到现在饭都没有吃，结果。。。呜呜，各位高手有没有做过类似的实验，给指点一下啊！谢谢。象这样的实验，你们一般一抗会按什么浓度开始试呢？10的7次方的细胞一般是用多少μg抗体进行孵育？ 参 ...

【求助】请教各位老师在测细胞内钙离子浓度时出现的问题 参与者：haitingmao 我在用Fluo3-AM，通过激光共聚焦显微镜检测肿瘤细胞内钙离子浓度的改变时，药物作用24小时后，一个显微镜视野下仅有2－3个细胞内有荧光，且集中在细胞的某一点，而非在细胞内均匀分布。请问这是怎么回事？为什么不是所有细胞都有荧光？ 焦急等待中 参与者：ljch20011455 我前段时间刚做了细胞内钙离子浓度变化检 ...

Specimen collection： Whole blood is collected in Vacutainer CPT （Becton-Dickinson） or 9 ml EDTA vials. Isolation of peripheral mononuclear cells： If CPT Vacutainer are used， we follow in principle the ...

【求助】PPARγ基因的序列 参与者：清风一号 有谁能提供PPARγ基因的序列吗?我将十分感激，谢谢！！！！ 参与者：yangea 楼主的描述不清楚，PPARγ基因的序列，哪个种属？楼主可以按照下述方法自己查找所需要的： 1、打开ncbi的主页http://www.ncbi.nlm.nih.gov/ 2、在search项下拉菜单中选择gene，同时在右边for查 ...

一、准备工作对开展细胞培养异常重要，推备工作中某一环节的疏忽可导致实验失败或无法进行。准备工作的内容包括器皿的清洗、干燥与消毒，培养基与其他试剂的配制、分装及灭菌，无菌室或超净台的清洁与消毒，培养箱及其他仪器的检查与调试等。 1、清洁、消毒、液体 直接接触细胞的用品要超净处理——无非必须分子 直接接触细胞的用品要彻底消除微生物 超净和消毒过的样品要绝对密闭保存，标记消毒时间 ...

污染的类型 细胞培养过程中的污染不仅仅指微生物，而且还包括所有混入培养环境中的、对细胞生存有害或造成细胞不纯的物质，包括生物和化学物质。 一、细菌污染 细菌污染是实验室细胞培养中常见的污染，即使在细胞培养液中加入了抗菌素(一般为预防剂量)，也可能因为操作不慎而引起污染。最常见的有革兰氏阳性菌，如枯草杆菌以及大肠杆菌、假单胞菌等革兰氏阴性菌，其中又以白色葡萄球菌较常见。 培养细胞受细菌污染后，会出现 ...