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        葡萄糖转运实验

        互联网

        6129

        【求助】关于葡萄糖转运实验的一些问题

        参与者:qqhhrainbow

        1、我买回来的氚-2D-葡萄糖,包装上标注的0.25mci……0.25ml in ethanol: water 9:1……这些信息如何理解,如果我要达到1 μCi/ml的加药量,应该从包装瓶里去出多少加入1ML水呢?

        2、还有就是最后收集细胞的问题,为什么有的实验是将液体收到滤纸上烤干放入闪烁瓶,有的是直接把收集液放入闪烁液呢?如果我做葡萄糖摄取实验该选择哪种方法呢?

        3、最后的问题是,实验为了平衡闪烁值还要检测没孔的蛋白含量,如果用NaOH裂解细胞,那么这裂解液能直接用于brodford法测蛋白么?或者还要有什么处理步骤?

        实验有太多疑惑,help me help me please,大家一起来摸索!谢谢

        参与者:ailaopo99

        我在做葡萄糖转运试验是遇到了第二个问题,用NaOH裂解细胞后提取的蛋白用brodford法测不出浓度(平时用RIPA+PMSF提蛋白时浓度很高),搭车请大侠指导一下!!!

        参与者:xkfang1018

        氚-2D-葡萄糖,上面除了注明它的μCi/ml,好像还注明了Ci/mmol,通过换算可以知道μCi/mol

        关于糖摄取实验,是干燥放在滤纸上还是收集液放在闪烁液中。

        1.干燥放在滤纸上,然后加入pop/popop闪烁液

        2.收集液,可能需要特殊闪烁液(比较昂贵),是能将水相和有机相混合起来的那种,如supermix

        裂解细胞,0.2%NaOH。我用BCA法,没干扰的。

        参与者:ailaopo99

        文献上很多也是用的Bradford法测蛋白浓度。是不是NaOH裂解的细胞蛋白经过处理后才能用于Bradford法测量呢?

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