• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        A549、ECV304、2BS三种细胞的传代

        互联网

        6704

        我养了三种贴壁的细胞,用同样的消化方法,都很好。这三种细胞是A549,ECV304,2BS。

        1、0.25%胰酶新鲜解冻,不需要预热。

        2、倒掉培养瓶中的培养基,并用预冷的D-Hank‘s洗两次(要冷,用前4度中取出)。

        3、加入约1-2ml的胰酶,晃动瓶子,使液体浸润瓶底。

        4、超净台上放置约1-2分钟(2BS需要的时间更短,约1分钟)

        5、镜下观察(我一般都省略了,因为每次的效果都很好),见细胞变圆或细胞间隙变大,即可加入含血清的培养基终止消化。(我们的胰酶都不去掉)

        6、从瓶口到瓶底吹打,可见细胞层脱落(那时能真正的理解什么是cell sheet)。

        7、收集离心。稀释,分瓶接种 。

        失败的经历:胰酶提前两天解冻,并于培养箱中放置了15分钟左右,消化时间为5分钟,我觉得时间太长了,就加了培养基终止消化。结果吹打了我十多分钟,还有很多没有吹下来。后来改成了直接解冻,不预热的方法。效果反倒好了。

        分析原因:解冻时间过长?

        心得:胰酶有时候的确可以不预热的。

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序