丁香实验_LOGO
登录
提问
我要登录
|免费注册
丁香实验推荐阅读
凋亡相关蛋白TFAR19蛋白的表达和细胞定位分析

TFAR19(PDCD5)是由本研究室在国际上首先报导的一个拥有自己知识产权的人类新基因,前期的功能研究表明,它是促进细胞凋亡的增强剂。利用荧光素(FITC)标记的TFAR19单克隆抗体为探针,对细胞凋亡过程中TFAR19蛋白的表达水平及定位研究发现,凋亡早期TFAR19表达水平增高并出现快速核转位现象,伴随着细胞核形态学的变化,持续较长时间,在凋亡小体中仍然可见。同时我们发现,凋亡早期TFAR19蛋白的核转位早于磷脂酰丝氨酸(PS)外翻和细胞核DNA的片段化,提示TFAR19蛋白的核转位是细胞凋亡更早期发生的事件之一。进一步的研究证明,凋亡早期TFAR19的核转位具有普遍意义,不同细胞凋亡早期均出现TFAR19高表达和核转位。这为研究细胞凋亡早期所发生的事件,提供了一种新的技术和指标。

丁香实验推荐阅读
Caspase-3活性的检测

Caspase家族在介导细胞凋亡的过程中起着非常重要的作用,其中caspase-3为关键的执行分子,它在凋亡信号传导的许多途径中发挥功能。Caspase-3正常以酶原(32KD)的形式存在于胞浆中,在凋亡的早期阶段,它被激活,活化的Caspase-3由两个大亚基(17KD)和两个小亚基(12KD)组成,裂解相应的胞浆胞核底物,最终导致细胞凋亡。但在细胞凋亡的晚期和死亡细胞,caspase-3的活性明显下降。

丁香实验推荐阅读
DNA片断化检测

细胞凋亡时主要的生化特征是其染色质发生浓缩, 染色质DNA在核小体单位之间的连接处断裂, 形成50~300kbp长的DNA大片段, 或180~200bp整数倍的寡核苷酸片段, 在凝胶电泳上表现为梯形电泳图谱(DNA ladder)。细胞经处理后,采用常规方法分离提纯DNA,进行琼脂糖凝胶和溴化乙啶染色,在凋亡细胞群中可观察到典型的DNA ladder.如果细胞量很少,还可在分离提纯DNA后,用32P-ATP和脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT)使DNA标记,然后进行电泳和放射自显影,观察凋亡细胞中DNA ladder的形成。

丁香实验推荐阅读
线粒体膜势能的检测

线粒体在细胞凋亡的过程中起着枢纽作用,多种细胞凋亡刺激因子均可诱导不同的细胞发生凋亡,而线粒体跨膜电位DYmt的下降,被认为是细胞凋亡级联反应过程中最早发生的事件,它发生在细胞核凋亡特征(染色质浓缩、DNA断裂)出现之前,一旦线粒体DYmt崩溃,则细胞凋亡不可逆转。

丁香实验推荐阅读
磷脂酰丝氨酸外翻分析(Annexin V法)

磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylserine, PS)正常位于细胞膜的内侧,但在细胞凋亡的早期,PS可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面,暴露在细胞外环境中(图3)。Annexin-V是一种分子量为35~36KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,能与PS高亲和力特异性结合。将Annexin-V进行荧光素(FITC、PE)或biotin标记,以标记了的Annexin-V作为荧光探针,利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生。

丁香实验推荐阅读
细胞凋亡的形态学检测

细胞凋亡与坏死是两种完全不同的细胞凋亡形式,根据死亡细胞在形态学、生物化学和分子生物学上的差别,可以将二者区别开来。细胞凋亡的检测方法有很多,下面介绍几种常用的测定方法。根据凋亡细胞固有的形态特征,人们已经设计了许多不同的细胞凋亡形态学检测方法。

丁香实验推荐阅读
罗氏 NimbleGen 推出 MS 200 微阵列扫描仪

罗氏 NimbleGen推出一款全新的高分辨率扫描仪- NimbleGen MS 200微阵列扫描仪。MS 200是首台经过优化能揭示阵列全部潜力并捕获所有NimbleGen DNA 微阵列完整图片的扫描仪。该产品进一步扩充了NimbleGen DNA微阵列处理系列产品,该家族包括一整套高分辨率的创新微阵列产品、设备和仪器以及数据分析软件。

丁香实验推荐阅读
蛋白质折叠软件

蛋白质折叠软件

丁香实验推荐阅读
电泳分析

电泳分析

丁香实验推荐阅读
感冒的免疫过程

感冒的免疫过程。

丁香实验推荐阅读
合成特定形状纳米尺度DNA结构的新方法

纳米技术的一个重要目标是复杂、三维纳米结构的可编程自我组装。以DNA为构造单元,合成方法已经发展到了可生成二维设计机构和某些三维结构的阶段。Douglas等人介绍了对脚手架式DNA折纸方法的一种优化,新方法能够生成有或多或少的任何所期望形式的三维目标,尺度达到10到100纳米,并且对各种不同的DNA螺旋之位置的控制也达到了令人印象深刻的程度。这种合成方法涉及排列成褶皱链及组装成蜂巢状三维结构的DNA螺旋。各种不同的DNA链通过磷酸基团连接在一起。这种方法能够生成组装速度慢的复杂目标,但它也为组装具有纳米尺度特征的定制器件提供了一个途径,如研究人员已经用这种方法构建出了形状像方螺帽、十字槽和线框二十面体的目标。

丁香实验推荐阅读
马尿酸钠培养基

马尿酸钠培养基:用纯培养物接种,于42℃培养48h,观察培养液是否到达试管壁上记号处,如不足时,用蒸馏水补足至原量。经离心沉淀,吸取上清液0.8mL,加入三氯化铁试剂0.2mL,立即混合均匀,经10~15min,观察结果。

丁香实验推荐阅读
苯丙氨酸培养基

自琼脂斜面上挑取大量培养物,移种于苯丙氨酸琼脂,在36±1℃培养4h或18~24h.滴加10%三氯化铁溶液2~3滴,自斜面培养物上流下,苯丙氨酸脱氨酶阳性者呈深绿色。

丁香实验推荐阅读
氨基酸脱羧酶试验培养基

除氨基酸以外的成分加热溶解后,分装每瓶100mL,分别加入各种氨基酸:赖氨酸、精氨酸和鸟氨酸。L-氨基酸按0.5%加入,DL-氨基酸按1%加入。再行校正pH至6.8。对照培养基不加氨基酸。分装于灭菌的小试管内,每管0.5mL,上面滴加一层液体石蜡,115℃高压灭菌10min.

丁香实验推荐阅读
葡葡糖铵培养基

用接种针轻轻触及培养物的表面,在盐水管内做成极稀的悬液,肉眼观察不见混浊,以每一接种环内含菌数在20~100之间为宜。将接种环灭菌后挑取菌液接种,同时再以同法接种普通斜面一支作为对照。于36±1℃培养24h.阳性者葡萄糖铵斜面上有正常大小的菌落生长;阴性者不生长,但在对照培养基上生长良好。如在葡萄糖铵斜面生长极微小的菌落可视为阴性结果。

丁香实验推荐阅读
蛋白胨水制备(靛基质试验用)

蛋白胨水(靛基质试验用)成分蛋白胨(或胰蛋白胨)20g氯化钠5g蒸馏水1000mLpH7.4制法按上述成分配制,分装小试管,121℃高压灭菌15min.靛基质试剂柯凡克试剂:将5g对二甲氨基苯甲醛溶解于75mL戊醇中。然后缓慢加入浓盐酸25mL.欧-波试剂:将1g对二甲氨基苯甲醛溶解于95mL95%乙醇内。然后缓慢加入浓盐酸20mL.试验方法挑取小量培养物接种,在36±1℃培养1~2d,必要时可培养4~5d.加入柯凡克试剂约0.5mL,轻摇试管,阳性者于试剂层呈深红色;或加入欧-波试剂约0.5mL,沿管壁流下,覆盖于培养液表面,阳性者于液面接触处呈玫瑰红色。注:蛋白胨中应含有丰富的色氨酸。每批蛋白胨买来后,应先用已知菌种鉴定后方可使用。

丁香实验推荐阅读
硫酸亚铁琼脂(硫化氢试验用)

硫酸亚铁琼脂(硫化氢试验用)成分牛肉膏3g酵母浸膏3g蛋白胨10g硫酸亚铁0.2g硫代硫酸钠0.3g氯化钠5g琼脂12g蒸馏水1000mLpH7.4制法加热溶解,校正pH,分装试管,115℃高压灭菌15min,取出直立候其凝固。试验方法挑取琼脂培养物,沿管壁穿刺,于36±1℃培养1~2d,观察结果。产硫化氢者使培养基变为黑色。注:肠杆菌科细菌测定硫化氢的产生,应采用三糖铁琼脂或本培养基。

丁香实验推荐阅读
培养基制备技术

在制备培养基的过程中,首先要使用一些玻璃器皿,如试管、三角瓶、培养皿、烧杯和吸管等。这些器皿在使用前都要根据不同的情况,经过一定的处理,洗刷干净。有的还要进行包装,经过灭菌等准备就绪后,才能使用。

丁香实验推荐阅读
营养明胶制作

营养明胶成分蛋白胨5g牛肉膏3g明胶120g蒸馏水1000mLpH6.8~7.0制法加热溶解、校正至pH7.4~7.6,分装小管,121℃高压灭菌10min,取出后迅速冷却,使其凝固。复查最终pH应为6.8~7.0.试验方法用琼脂培养物穿刺接种,放在22~25℃培养,每天观察结果,记录液化时间。或放在36士1℃培养,每天取出,放冰箱内30min后再观察结果。

丁香实验推荐阅读
Hugh-Leifson培养基(O/F试验用)

Hugh-Leifson培养基(O/F试验用)成分蛋白胨2g氯化钠5g磷酸氢二钾0.3g琼脂4g葡萄糖10g0.2%溴麝香草酚蓝溶液12mL蒸馏水1000mLpH7.2制法将蛋白胨和盐类加水溶解后,校正pH至7.2.加入葡萄糖、琼脂煮沸,溶化琼脂,然后加入指示剂。混匀后,分装试管,121℃高压灭菌15min,直立凝固备用。试验方法从斜面上挑取小量培养物作穿刺接种,同时接种两支培养基,其中一支于接种后滴加溶化的1%琼脂液于表面,高度约1cm,于36±1℃培养。

提问
扫一扫
丁香实验小程序二维码
实验小助手
丁香实验公众号二维码
扫码领资料
反馈
TOP
打开小程序