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1. 抗原本身的有关性质：抗原刺激免疫动物产生抗体的能力，是否使用佐剂，注射途径及注射间隔时间等。2. 抗原必须纯化：对于免疫用的抗原，成分必须均一，除了作为免疫原的抗原物质外，不能含有可激发机体产生其它抗体的物质。在制备病毒抗血清时，必须去除寄主蛋白成分；假若这种材料是互不相同的病毒复合感染的，还必须将这些互不相同的病毒一一分离。只有制备了具有一定浓度的纯化的抗原，才能制备出高效价的专业性抗血清 ...

1． 剪取一小条0.45 μm 的硝酸纤维膜，置于1.5ml eppendorf 管中，浸没于1 ml，1 mg/ml 的抗原溶液中，5 min。2． 取出膜，置于滤纸上干燥。3． 将膜放置于装有1 ml Buffer A 的eppendorf 管，轻轻震荡混匀30 min。4． 移去Buffer A，用新鲜的Buffer A 洗一次，将膜浸没于0.8-1 ml 相应的抗血清中，1-2 h ...

一．实验器材：1． 器材：40孔塑料板、40孔板离心机、微量加样器、振荡器、盖玻片、荧光显微镜等。2． 试剂：单抗隆抗体（单抗）、荧光标记抗鼠免疫球蛋白、PBS（pH7.2-7.4）、甘油、叠氮钠（NaN3）等。二．方法（微量法）1． 将分离好的单个核细胞用PBS洗2次，1000rpm每次10分钟。用含0.1% NaN3 PBS调细胞浓度在0.5-1×108/ml（5000万-1亿/m ...

在免疫酶技术中，有时需要将样品液（如抗原、抗体、酶、酶标抗体或酶标抗原）浓缩。常用的浓缩技术如下：1.反透析法如果在装有样品液的透析袋周围放上浓度很高的且具有吸水作用的多聚物或蔗糖，由于膜内渗透压比膜外低，膜内样品液中的蛋白质进行浓缩。常用的多聚物有聚乙烯吡咯酮（Polyvinylpyrrolidone简称PVP，分子量约12000）、聚乙二醇（Polyethylene glycol简称PEG亦称 ...

一，酶免疫电泳技术的原理抗原与抗体在琼脂糖凝胶中电泳时，在碱性缓冲液的条件下，抗原带负电，向正极移动。不同分子量或还不同电荷的抗原，在相同条件下，移动距离不等。这些在不同部位的抗原，再与相关抗体经扩散形成免疫沉淀线。酶免疫电泳技术中的抗原与抗体就是酶和它的相应抗体球蛋白。酶抗原与酶抗体形成的免疫复合物是用底物显色的，由于酶反应的高度灵敏性，使酶免疫电泳技术成为一项灵敏度高的检测技术，但仅局限于酶蛋 ...

操作步骤：提示：（1） 第一次使用前请先在漂洗液RW瓶和70%乙醇瓶中加入指定量无水乙醇！（2） 使用前将10X红细胞裂解液RLB用DEPC处理水稀释到1X。（3） 操作前在裂解液RLT中加入β-巯基乙醇至终浓度1%，如1 ml RLT 中加入10μl β-巯基乙醇。此裂解液最好现用现配。配好的RLT 4℃可放置一个月。1. 在适合大小的RNase free离心管中加入1 ...

一、原理 大肠杆菌染色体呈环状。高频重组菌株（Hfr）的染色体上整合有F因子，当Hfr细菌与F－细菌细胞发生接合（即杂交）时Hfr细胞（供体菌）的染色体从Hfr细胞向F－细胞内转移。由于染色体的转移具有一定的方向性，并且可以随时中断，因此根据结合后F－细菌（以重组子形式选出）中Hfr细菌染色体基因出现次数的多少，即可得知基因转移的先后顺序，也就是说基因在染色体上排列的顺序。转移时，靠近转移起始点 ...

直接点样法最早由Stanford大学Brown实验室发展而来，是将微量的寡聚核苷酸片段、cDNA或蛋白质等通过特定的高速点样机器人直接排列到玻片等介质上，生物大分子探针通过共价键或离子键与特殊处理的玻片相连，从而制备成芯片。直接点样法主要包括3个重要的环节：探针的准备，载体的表面修饰和点样。 1．探针的准备 根据实验的目的，选择相应的探针及种类，基因芯片的探针主要有寡核苷酸或cDNA。对于寡核苷 ...

(1)试剂和材料 以下所用的试剂，除特别注明外均为分析纯试剂，水为符合GB／T6682规定的二级水。 ①环丙沙星 含环丙沙星不得少于99．0％ ②恩诺沙星 含环丙沙星不得少于99．0％ ③乙腈：色谱纯 ④三乙胺 ...

一、目的 本实验的目的是学会原位杂交的使用方法。了解各种原位杂交的基本原理和优缺点。 二、原理 原位杂交组化（简称原位杂交，in situ hybridization histochemistry；ISHH）属于分子杂交的一种，是一种应用标记探针与组织细胞中的待测核酸杂交，再应用标记物相关的检测系统，在核酸原有的位置将其显示出来的一种检测技术。原位杂交的本质就是在一定的温度和离子浓度下，使具有特 ...

Reaction 1 μl 10X Transcription Buffer (Ambion) 1 μl 10X NTPs (4 mM ATP CTP 1 mM GTP UTP) 2 μl 10 mM GpppG cap (Pharmacia) 2 μl a-UTP (NEN) 800 Ci/mmol 0.2 μl RNasin (Promega) 1 μl ...

Reagents/Solutions DNA (PCR or plasmid) with bacteriophage RNA polymerase promoter in suitable orientation (see note 1) ~1μg/μl in TE buffer 10mM MgCl2 5x Transcription Buffer 0.2M Tris - HCl p ...

一、原理 1.葡聚糖凝胶SephadexG-200凝胶柱层析利用大分子不能进入凝胶颗粒内部最先流出柱外，而小分子物质进入凝胶颗粒内部，流速慢而最后流出柱外，凝胶层析法能将不同分子大小的物质分离开。（G-200能分离800-80000D分子量的蛋白质） 2.利用离子交换法，选取DEAE-阴离子纤维素DE52柱材料，因为PPO是带有阳离子的蛋白质，在层析时会吸附在柱材料上，而杂蛋白会洗下。后用NaC ...

一、实验目的 学习RNA琼脂糖凝胶电泳的使用技术。 二、实验原理 RNA可以使用非变性或变性凝胶电泳进行检测。在非变性电泳中，可以分离混合物中不同分子量的RNA分子，凡是无法确定分子量。只有在变性情况下，RNA分子完全伸展，其泳动率才与分子量成正比。 判断RNA提取物的完整性是进行电泳的主要目的之一。完整的未降解的RNA制品的电泳图谱应可清晰看到18s rRNA、28s rRNA、5s rRNA ...

（1）将初步纯化的SPA与HRP用过碘酸钠氧化法（交联反应时间在22℃下5h）交联。 （2）将上述PPA溶液过Sephadex G-100柱，条件同前。所收集的第1管至第22管的合并液，是PPA存在的主要组分，可用ELISA塑料平板法检测活性。将合并液浓缩，然后加入30%左右甘油，贮于4℃冰箱备用 PPA的使用: (1) PPA-ELISA法。基本上与ELISA法相同，PPA代替了酶标抗抗体。在 ...

内源性干扰因素一般包括类风湿因子、补体、高浓度的非特异免疫球蛋白、异嗜性抗体、某些自身抗体、因使用鼠抗体治疗或诊断诱导的抗鼠Ig抗体、交叉反应物质等。在日常的临床血清（浆）标本中，有相当比例不同程度的含有上述各种干扰物质，从而导致测定结果的假阳性。 1.类风湿因子（rheumatoid factorsRF）在类风湿患者、其他疾病以及正常人血清中常含有较高或不同浓度的RF，RF一般为TgM型，亦有 ...

操作步骤： 提示： （1） 第一次使用前请先在漂洗液RW瓶加入指定量无水乙醇! （2） 操作前在裂解液RLT中加入β-巯基乙醇至终浓度1%，如1 ml RLT 中加入10μl β-巯基乙醇。此裂解液最好现用现配。配好的RLT 4℃可放置一个月。 1. 直接研磨法（推荐）: a. 新鲜植物组织称重后取100mg迅速剪成小块放入研钵（冰冻保存或者液氮保存样品可直 ...

载体主要有病毒和非病毒两大类其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。 一、一个合格质粒的组成要素 1 复制起始位点Ori 即控制复制起始的位点。原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。 2 抗生素抗性基因 可以便于加以检测，如Amp+ Kan+ 3 多克隆位点MCS 克隆携带外源基因片段 4 P/E 启动子 ...

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）是蛋白分析中最经常使用的一种方法。它是将蛋白样品同离子型去垢剂十二烷基硫酸钠（SDS）以及巯基乙醇一起加热，使蛋白变性，多肽链内部的和肽链之间的二硫键被还原，肽链被打开。打开的肽链靠疏水作用与SDS结合而带负电荷，电泳时在电场作用下，肽链在凝胶中向正极迁移。不同的大小的肽链由于在迁移时受到的阻力不同，在迁移过程中逐渐分开，其相对迁移率与 ...

1. 学习血红蛋白电泳分离方法； 2. 能辨认正常人和异常血红蛋白的电泳图谱； 血红蛋白是一种结合蛋白质，由血红素和珠蛋白组成。正常人所含珠蛋白的多肽链有a、b、d 、e、g和z六种。这六种肽链的基因在人体发育的不同阶段表达状况不一。正常成人红细胞中有三种血红蛋白即HbA、 HbA2 和 HbF。HbA（a2b2）是正常成人红细胞中的最主要的血红蛋白，占红细胞内血红蛋白总量的96 ...