• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        in vitro Transcription

        互联网

        6502

        Reaction

        1 μl 10X Transcription Buffer (Ambion)

        1 μl 10X NTPs (4 mM ATP, CTP, 1 mM GTP, UTP)

        2 μl 10 mM GpppG cap (Pharmacia)

        2 μl a[32P]-UTP (NEN) 800 Ci/mmol

        0.2 μl RNasin (Promega)

        1 μl 0.1M DTT

        1.8 μl H2O

        0.5 μl Linearized Transcription Template (1 μg/μl)

        0.5 μl Polymerase (SP6/T7/T3)

        Incubate for 1 hour at 37°C.

        Add 10 μl STOP solution (formamide loading buffer) to each reaction, boil, and load onto a pre-run 5% denaturing polyacrylamide gel.

        Run desired distance.

        Cut out bands and soak in 500 μl RNA elution buffer (300 mM NaOAc, pH 6.1, 0.2% SDS, 1 mM EDTA) for 1 hour - overnight

        Precipitate RNA with 2 volumes ethanol.

        Resuspend in 20 μl H2O and quantitate 0.5 μl.

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序