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        PPA制备与使用的基本技术

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        (1)将初步纯化的SPA与HRP用过碘酸钠氧化法(交联反应时间在22℃下5h)交联。

        (2)将上述PPA溶液过Sephadex G-100柱,条件同前。所收集的第1管至第22管的合并液,是PPA存在的主要组分,可用ELISA塑料平板法检测活性。将合并液浓缩,然后加入30%左右甘油,贮于4℃冰箱备用。

        PPA的使用:

        (1) PPA-ELISA法。基本上与ELISA法相同,PPA代替了酶标抗抗体。在进行微量反应板测定时,PPA常常加入0.1ml,稀释度一般在1:2至1:100(应按不同情况试验)。PPA与IgG是化学共价结合,反应时间不宜过长,不应超过2h,控制在30min-60min,反应时间过长会使PPA吸附到塑料载体上去。

        (2) 用PPA进行组织内有关抗原的定位。甲醛对PPA有显色影响,因此组织不可用甲醛固定,可用甲醛、乙醇等。PPA对组织内抗原(先与IgG结合)的定位,反应时间可以延长,便于渗透入组织细胞内,且没发现严重的物理吸附现象。

        (3) 在PPA实验中稀释液常用含0.5%(v/v)Tween20的0.02mol/L Ph 7.4 Tris-HC1缓冲液(2.42gTris溶于蒸馏水后用0.1N HC1调pH至7.4,然后加蒸馏水定容至1000ml,最后加0.5ml Tween 20)。

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