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        酶免疫电泳技术

        互联网

        2077

        一,酶免疫电泳技术的原理

        抗原与抗体在琼脂糖凝胶中电泳时,在碱性缓冲液的条件下,抗原带负电,向正极移动。不同分子量或还不同电荷的抗原,在相同条件下,移动距离不等。这些在不同部位的抗原,再与相关抗体经扩散形成免疫沉淀线。

        酶免疫电泳技术中的抗原与抗体就是酶和它的相应抗体球蛋白。酶抗原与酶抗体形成的免疫复合物是用底物显色的,由于酶反应的高度灵敏性,使酶免疫电泳技术成为一项灵敏度高的检测技术,但仅局限于酶蛋白的分析鉴定。

        二,辣根过氧化物酶(HRP)免疫电泳技术的程序

        1, 器材与设备

        电泳仪(包括电泳槽);温箱;载玻片(7.5cm×2.5cm);小玻棒(长4cm左右,直径约1.5mm);打孔器;铺有湿纱布的带盖搪瓷盒。

        2, 材料与试剂

        感染病毒的植物病叶,健株叶片作对照;辣根过氧化物酶(精制)制备的兔抗酶抗体;琼脂糖;0.1mol/pH8.6巴比妥钠盐酸缓冲液;底物与供氢体混合液(H2O2和DAB-4HC1)。

        3,实验程序

        (1)将小玻棒放在洁净的载玻片中央,然后将3ml溶化的琼脂糖溶液(0.8g琼脂糖/100ml巴比妥钠盐酸缓冲液)浇制其上,待冷凝后,用针尖挑去玻棒,中央出现一穴槽。

        (2)在穴槽一端的两侧近边沿2mm处各打一小孔(直径2-3mm),在一孔穴中加入健株叶片汁液,在另一孔穴加入感染病毒的植株叶片汁液。

        (3)加汁液的孔穴一端接负极,电泳缓冲液仍是0.1mol/LpH8.6巴比妥钠盐酸缓冲液,电压150V,电泳1h。

        (4)在穴槽加入抗HRP兔血清,置于湿盒中,在37℃温箱中反应3h左右或室温过夜。

        (5)在生理盐水中浸洗3-4天,每天换水3次。

        (6) 敷上干净的湿滤纸,置于40℃烘箱内烘干。

        (7)浸入底物显色,从沉淀弧的形状,部位不同,比较健,病汁液所形成的沉淀线。

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