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染色质免疫沉淀法（Chromatin immunoprecitation,ChIP)是研究体内ＤＮＡ与蛋白质相互作用的重要工具.它可以灵敏地检测目标蛋白与特异ＤＮＡ片段的结合情况,还可以用来研究组蛋白与基因表达的关系.核小体组蛋白可以发生多种翻译后的共价修饰,如乙酰化、甲基化、磷酸化、泛素化等,这些共价修饰与真核基因的表达密切相关.根据“组蛋白密码”假说,组蛋白的各种共价修饰的组合,会以协同或拮抗的方式诱导特异的下游 ...

miRNA是一种重要的非编码RNA，调控至少 30% 以上的基因表达，参与多种生理病理过程。2011年4月27日，Sanger microRNA序列数据库(miRBase)升级至17.0版。在新版本中，发夹前体序列升至16769条，新增1597条；成熟miR和miundefined产物共19724条，新增2383条；新版本报道序列共涵盖153个物种。目前已公布的人成熟microRNA为1711个，还有大量预测的microRNA基因需要通过 ...

【申请置顶】【讲座预告】11月30日 病毒基因工程国家重点实验室 吴小兵博士 病毒载体与基因治疗系列讲座专家讲座活动通知表：主讲人姓名：吴小兵==========================================主讲人个人成就简介吴小兵博士做为课题负责人承担了863计划基因治疗重大关键项目课题“应用于恶性肿瘤基因治疗的新型病毒载体的研制”（2000年结题）和攀登计划课题子课题“用于基因治疗的新型载体的研制”（1999年结题）， 863计划中试项目“rAA ...

RNAi－－从理论到实践，再到诺贝尔医学和生理学奖RNAi早期研究RNAi（RNA interference）是一古老的机制，最初来源于1990年Napoli在牵牛花Napoli et al. Plant Cell, 1990和Cogoni在脉孢菌Cogoni C and Macino G. Proc Natl Acad Sci U S A. 1997中的发现，即转基因的共抑制现象（consuppression）。早期认为基因共抑制是基因副突变的范畴，但是靶基因序列具有明显不同的特征 ...

EMSA实验技术探讨EMSA是一个比较复杂的试验技术,由于工作原因接触这个试验技术到现在也有三年多的时间了,做了大概也有几百次吧, 那倒理想的试验结果的同时也碰到了很多莫名的问题和结果,到现在为止还有没有解决的,找不到原因的一个问题,呵呵! 现和smalldonkey商量一下将我对这个实验技术的总结和一个心得写出来给大家分享,批评指正.EMSA实验技术作为一个经典的DNA/protein,RNA/protein的检测 ...

最近看到很多战友在论坛上询问如何查询基因序列、如何进行引物设计、如何使用BLAST进行序列比对……，这些问题在NCBI上都可以方便的找到答案。现在我就结合我自己使用NCBI的一些经历（经验）跟大家交流一下BCBI的使用。希望大家都能发表自己的使用心得，让我们共同进步！我分以下几个部分说一下NCBI的使用：Part one： 如何查找基因序列、mRNA、Promoter （第一页）Part two ：如何查找连续的mRNA、cDNA、蛋 ...

为特别鼓励，加两分！并继续跟踪！----mybbff近日打了一个关于核酸抽提的基础现状的草稿；没有去找参考书润色，所以会有点凌乱。首先声明的是：这篇东西只为有一定核酸抽提基础知识的人准备，同时也将会及时修改 (我突然发现了 edit 的功能)。那些分子生物学的过客，最好不要看本文；一是我的思维有点跳跃，二则是没有必要糟蹋自己的时间。写这篇东西的另外一个原因是，我一直在思考如何简化经典的无介质的核酸抽提程序。最经典的是裂解一步，去 ...

欢迎大家光临腺病毒之家！希望在这里可以找到你想要的东西！最近，着手将本帖的目录整理了一下，这样便于大家快速找到自己需要的东西！为了促进核酸版的发展和满足广大战友的需求，还请战友们多多提出宝贵的建议！Page 1：1. 电转化感受态的制备2. 穿梭载体Pme I 线性化及回收3. 重组腺病毒质粒的判定4. 化学转化法同源重组Page 2：1. 同源重组的形式2. 阳性重组质粒的判定3. 重组腺病毒的包装（质粒纯化、线性化、转染）Page 3：1. 阳性重组质粒的判定2. 长片 ...

siRNA，shRNA，dsRNA，miRNA间的区别RNA干扰（RNAi），即用20多个核苷酸组成的短的双链RNA（siRNA）代替传统反义核酸进行转录后基因沉默，已经迅速而广泛地应用到基因功能，基因表达调控机制研究等热门领域，并为基因治疗开辟了新的途径。近两年来，这方面的科学论文及报道爆炸性增长，几乎每天都有新的结果涌现。这些论文中，出现了很多与RNA干扰相关的概念，意思很相近但并不完全相同，这里列举了几个常见 ...

我做不出来克隆的时间长达半年，期间克隆实验方面许多问题都遇到过，现在总结主要的一些问题和大家交流，希望大家以后不要犯我一样的错，少走弯路。1、感受态细菌本身有质粒污染，这个问题困扰了我三个月，一直到最近才找到原因，我这里犯了最大的错是没有做过感受态检测。也许大家奇怪为什么在三个月内的时间里没有怀疑到感受态，不用奇怪，因为感受态“表现的太正常了”，每次涂板都长菌斑，每板20-30左右，很正常；我一个同学用这样的感受态 ...

1.关于Trizol的购买：目前市面上买的大多是100ml装的，比较出名的是Invitrogen公司的Trizol，100ml原装的据说要1200大洋以上，不过有一种据说香港分装的，只需600元，但是相对国产品牌三四百元的价格还是贵了一些。国产很多公司都有类似的Trizol试剂，价格大多三百多元，成分都差不多，可以说都是invitrogen的山寨产品。比如我用的是北京一家公司的，四百多，做出来也还不错。Taka ...

在美国，有一个叫“冷泉港”的地方，那里被誉为生命科学的圣地，是分子生物学者们神往之处。1982年，一部叫《分子克隆实验指南》的书在冷泉港实验室出版社诞生，它的前身是1980年冷泉港真核基因分子克隆讲习班实验方案的汇编。7年后，该书又出了第二版。当时的人们也许未曾料到，这部著作在20年的时间里竟成为指导生命科学前沿科研工作的一部“圣经”。　　然而，生命科学的发展突飞猛进，研究技术也是日新月异，昔日的经典似乎已经不能再继续满足 ...

自己的实验刚刚开始，又涉及到质粒的提取。翻译了OMEGA 的大/小规模质粒提取试剂盒的说明书（D6922-01和D6942-01）。希望能给和我一样的新手一点帮助，同时请大家指正多给建议，特别是自己的心得啊。全是自己打的，帮顶让大家都能下啊:)E.Z.N.A Plasmid Miniprep Protocol 质粒小规模提取试剂盒Product Number D6942 and D6943,D6944注意：1．使用之前，把试剂盒中的一小管RNA酶加入溶液 ...

REAL-TIME 引物设计与是否跨内含子的检测方法1.园子里最详细的检测引物是否跨内含子的流程2.提供多图显示如何找到基因外显子与内含子3.如何最简便设计跨内含子的引物（利用primer-blast）感谢隔壁的山西人提出这个问题，以及丁香园，google，百度，PUBMED提供解决问题的方法和线索供我拼凑整理。问题一：如何在pubmed上找到目标基因的DNA序列以及其内含子和外显子情况。步骤：打开NCBI主页面，选 ...

“表观遗传学现在成为了肿瘤研究中的热点问题。我们现在已经很清楚肿瘤的形成都伴随着DNA甲基化和组蛋白的修饰异常。全基因组的低甲基化（hypomethylation），抑癌基因启动子CpG岛高度甲基化(hypermethylation)，众多关键基因的组蛋白密码被改变，以及组蛋白H4去已酰化和三甲基化，这些都是肿瘤细胞异常表观遗传谱的明显特征。、、、，我们有必要建立一个雄心勃勃的计划去认识肿瘤发生中DNA 甲基化和组 ...

双酶切连接反应之全攻略前一阵子一直在做双酶切质粒重组，失败了 很多次，不过很快改善了 实验方法，用2周重组了 14个质粒。现就自己的体会，结合丁香园战友的宝贵经验，谈一下质粒重组的一些个人经验。1、回收PCR产物：在进行PCR扩增时候，给引物两端设计好酶切位点，一般说来，限制酶的 选择非常重要，尽量选择粘端酶切和 那些酶切效率高的限制酶，如BamHI,HindIII,提前看好各公司的双切酶所用公用的BUFFER，以及各酶在公用BUF ...

动物体内转染，简单地说，就是用RNA和DNA直接打动物完成干扰和表达。再通俗地说，用合成的(RNA)或者提取的核酸(DNA)，就可以完成以前的动物转基因或者基因敲除的实验，无需再用病毒或者基因敲除动物。实验周期可以缩短为几天，花费几千元即可进行实验。动物体内转染技术的出现，让广大生物医学研究者，轻松进行动物的基因干扰、导入等操作。尤其是临床医学工作者，可以在很少工作量较少经费的情况下，直接针对研究的疾病进行动物实验， ...

酶切基础知识酶切DNA酶切一般分为质粒直接酶切和PCR产物酶切。DNA酶切及凝胶电泳一.DNA的限制性内切酶酶切分析　　限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上,并切割双链DNA。它可分为三类:Ⅰ类和Ⅲ类酶在同一蛋白质分子中兼有切割和修饰(甲基化)作用且依赖于ATP的存在。Ⅰ类酶结合于识别位点并随机的切割识别位点不远处的DNA，而Ⅲ类酶在识别位点上切割DNA分子,然后从 ...

进了新实验室后一直用Gateway做克隆，发现论坛上很少有讨论gateway的帖子，特开此贴，也欢迎对gateway有经验，有兴趣和有疑问的同行们一起交流经验Gateway官方简介：Gateway®克隆技术的基础是lambda噬菌体的位点特异性重组反应，一种准确保存遗传信息的有效的自然的生化途径。与传统的需要DNA限制性内切酶、DNA连接酶、凝胶电泳和Dundefined*段纯化等多个步骤的单调乏味的亚克隆方法相比 ...

Methods in Enzymology ,Volume 427Elsevier Science,2007; 304стрISBN: 0123739179MicroRNAs (miRNA) are tiny bits of genetic material that were unknown nearly 10 years ago but now represent an exciting field of study in biology. Upon their discovery, researchers revealed for the first t ...