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快速的操作，低温环境，少量取上清主要是抽提之后吸取上清时要特别小心，只要不把蛋白层吸出来就不会有RNase污染。分子克隆第二版343页,上关于提取RNA所用的玻璃容器的处理方法,是用前180度干烤8小时或更长时间;另一种方法是0.1%的depc水浸泡(37度2小时),然后灭菌水淋洗数次,100度干烤15分钟,然后高压灭菌除去depc.我们实验室一直是用170度考4小时,且不准离人,不准过夜,可能是怕烤箱长时间高温, ...

凝胶迁移或电泳迁移率检测（Electrophoretic Mobility Shift Assay, EMSA）是一种检测蛋白质和DNA序列相互结合的技术，最初用于研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用，可用于定性和定量分析。这一技术目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。加分原则：1. 你可以在此跟帖提问。如果你的问题有一定深度，引发战友们积极讨论和思考。加1-2分。2. 回答问题或介绍经验。可加1-2分。 ...

目的：1、方便地提供文件的上传下载，减轻dxy服务器的承荷。2、为战友们提供资料交流的平台，尤其是低分战友。使用说明1、邮箱名称：ng_dxy@163.com(停止上传)；新邮箱：xuxh008@gmail.com备用邮箱：hesuanjishu@yahoo.com.cn注：请上传资料到新邮箱时同时上传一备份到备用邮箱2、欲提供共享的资料不超过30M。上传到邮箱前请先提出申请。格式 如下：资料名称-资料内容-资料大小-资料来源-（实 ...

很多战友（包括我）对“复杂”的生物学软件和厚厚的软件使用说明书充满了恐惧，以至于始终不能够用它们来提高自己的工作效率。很多不太懂电脑的战友就是被这些复杂的东西吓得永远不敢去用软件的。我们做StepByStep的初衷就是让初学者按图索骥地几分钟之内就学会怎么用一个生物学软件，而更进一步的功能可以在使用中自己去慢慢摸索。StepByStep的中心思想：++++几分钟，一个例子学会一个软件的基本使用！++++目标读者：生命 ...

前段时间在丁香园上查找关于启动子分析的文章，帖子很多，但感觉介绍得都不够详细，而且时间比较久远，对于新手来说不是很明白和清楚，小弟在此借花献佛，在各位前辈大能的基础上略加总结，希望对需要的人有所帮助。不当之处也请各位指正！ 注意事项 ： 如果你想问有没有什么捷径，能够既保证查找目的基因启动子区域快速、准确、而又简洁方便明了的话，请看本帖最后一页 不过看完请记得顶哦！ 对于要分析的基因，我们需要搞清楚它的一些基本信息，第一步借助NCBI ...

RNA干扰（RNAi）：近年来的研究表明，将与mRNA对应的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA(dsRNA)导入细胞，可以使mRNA发生特异性的降解，导致其相应的基因沉默。这种转录后基因沉默机制(post-transcriptional gene silencing, PTGS)被称为RNA干扰（RNAi）。MicroRNA（miRNA,微RNA）：即为长度为22nt左右的5′端带磷酸基团、3′端带羟基的非蛋白编码的调控小RN ...

如何选择酶切缓冲液，如何提高酶切效率，尤其是PCR产物的酶切、双酶切、特殊酶切，总结了以下几点，希望对大家有帮助，欢迎补充！1.PCR产物的酶切。PCR产物的酶切与引物上引入的保护碱基有很大的关系，所以设计引物的时候就应该注意到这一点，如何选择保护碱基，具体参见NEB网站上关于保护碱基的资料:PCR产物的酶切相关的帖子：http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/242899_1. ...

最近有不少战友在做ChIP实验，希望我的一点经验对大家有帮助（本贴不谈实验步骤，最后我会附件一份说明书，有详细步骤，另外建议像我一样的新手用试剂盒，避免不必要的麻烦）一、原理转录从基因的启动子区开始，由一系列的转录因子结合到基因的启动子区，通用转录因子结合在基本启动子区起始转录，而这个过程对基因的转录是必需的，但不是充分的，通常需要一些特异的转录因子结合在上游调节序列，使基因特异表达并维持的合适水平，ChIP主 ...

提供给新手，希望对各位战友有帮助，多多参与核酸技术版的讨论！引物篇1.引物是如何合成的？目前引物合成基本采用固相亚磷酰胺三酯法。DNA合成仪有很多种, 主要都是由ABI/PE 公司生产，无论采用什么机器合成，合成的原理都相同，主要差别在于合成产率的高低，试剂消耗量的不同和单个循环用时的多少。亚磷酰胺三酯法合成DNA片段，具有高效、快速的偶联以及起始反应物比较稳定的特点。亚磷酰胺三酯法是将DNA固定在固相载体上完成DNA链 ...

染色质免疫沉淀法（Chromatin immunoprecitation,ChIP)是研究体内ＤＮＡ与蛋白质相互作用的重要工具.它可以灵敏地检测目标蛋白与特异ＤＮＡ片段的结合情况,还可以用来研究组蛋白与基因表达的关系.核小体组蛋白可以发生多种翻译后的共价修饰,如乙酰化、甲基化、磷酸化、泛素化等,这些共价修饰与真核基因的表达密切相关.根据“组蛋白密码”假说,组蛋白的各种共价修饰的组合,会以协同或拮抗的方式诱导特异的下游 ...

miRNA是一种重要的非编码RNA，调控至少 30% 以上的基因表达，参与多种生理病理过程。2011年4月27日，Sanger microRNA序列数据库(miRBase)升级至17.0版。在新版本中，发夹前体序列升至16769条，新增1597条；成熟miR和miundefined产物共19724条，新增2383条；新版本报道序列共涵盖153个物种。目前已公布的人成熟microRNA为1711个，还有大量预测的microRNA基因需要通过 ...

【申请置顶】【讲座预告】11月30日 病毒基因工程国家重点实验室 吴小兵博士 病毒载体与基因治疗系列讲座专家讲座活动通知表：主讲人姓名：吴小兵==========================================主讲人个人成就简介吴小兵博士做为课题负责人承担了863计划基因治疗重大关键项目课题“应用于恶性肿瘤基因治疗的新型病毒载体的研制”（2000年结题）和攀登计划课题子课题“用于基因治疗的新型载体的研制”（1999年结题）， 863计划中试项目“rAA ...

RNAi－－从理论到实践，再到诺贝尔医学和生理学奖RNAi早期研究RNAi（RNA interference）是一古老的机制，最初来源于1990年Napoli在牵牛花Napoli et al. Plant Cell, 1990和Cogoni在脉孢菌Cogoni C and Macino G. Proc Natl Acad Sci U S A. 1997中的发现，即转基因的共抑制现象（consuppression）。早期认为基因共抑制是基因副突变的范畴，但是靶基因序列具有明显不同的特征 ...

EMSA实验技术探讨EMSA是一个比较复杂的试验技术,由于工作原因接触这个试验技术到现在也有三年多的时间了,做了大概也有几百次吧, 那倒理想的试验结果的同时也碰到了很多莫名的问题和结果,到现在为止还有没有解决的,找不到原因的一个问题,呵呵! 现和smalldonkey商量一下将我对这个实验技术的总结和一个心得写出来给大家分享,批评指正.EMSA实验技术作为一个经典的DNA/protein,RNA/protein的检测 ...

最近看到很多战友在论坛上询问如何查询基因序列、如何进行引物设计、如何使用BLAST进行序列比对……，这些问题在NCBI上都可以方便的找到答案。现在我就结合我自己使用NCBI的一些经历（经验）跟大家交流一下BCBI的使用。希望大家都能发表自己的使用心得，让我们共同进步！我分以下几个部分说一下NCBI的使用：Part one： 如何查找基因序列、mRNA、Promoter （第一页）Part two ：如何查找连续的mRNA、cDNA、蛋 ...

为特别鼓励，加两分！并继续跟踪！----mybbff近日打了一个关于核酸抽提的基础现状的草稿；没有去找参考书润色，所以会有点凌乱。首先声明的是：这篇东西只为有一定核酸抽提基础知识的人准备，同时也将会及时修改 (我突然发现了 edit 的功能)。那些分子生物学的过客，最好不要看本文；一是我的思维有点跳跃，二则是没有必要糟蹋自己的时间。写这篇东西的另外一个原因是，我一直在思考如何简化经典的无介质的核酸抽提程序。最经典的是裂解一步，去 ...

欢迎大家光临腺病毒之家！希望在这里可以找到你想要的东西！最近，着手将本帖的目录整理了一下，这样便于大家快速找到自己需要的东西！为了促进核酸版的发展和满足广大战友的需求，还请战友们多多提出宝贵的建议！Page 1：1. 电转化感受态的制备2. 穿梭载体Pme I 线性化及回收3. 重组腺病毒质粒的判定4. 化学转化法同源重组Page 2：1. 同源重组的形式2. 阳性重组质粒的判定3. 重组腺病毒的包装（质粒纯化、线性化、转染）Page 3：1. 阳性重组质粒的判定2. 长片 ...

siRNA，shRNA，dsRNA，miRNA间的区别RNA干扰（RNAi），即用20多个核苷酸组成的短的双链RNA（siRNA）代替传统反义核酸进行转录后基因沉默，已经迅速而广泛地应用到基因功能，基因表达调控机制研究等热门领域，并为基因治疗开辟了新的途径。近两年来，这方面的科学论文及报道爆炸性增长，几乎每天都有新的结果涌现。这些论文中，出现了很多与RNA干扰相关的概念，意思很相近但并不完全相同，这里列举了几个常见 ...

我做不出来克隆的时间长达半年，期间克隆实验方面许多问题都遇到过，现在总结主要的一些问题和大家交流，希望大家以后不要犯我一样的错，少走弯路。1、感受态细菌本身有质粒污染，这个问题困扰了我三个月，一直到最近才找到原因，我这里犯了最大的错是没有做过感受态检测。也许大家奇怪为什么在三个月内的时间里没有怀疑到感受态，不用奇怪，因为感受态“表现的太正常了”，每次涂板都长菌斑，每板20-30左右，很正常；我一个同学用这样的感受态 ...

1.关于Trizol的购买：目前市面上买的大多是100ml装的，比较出名的是Invitrogen公司的Trizol，100ml原装的据说要1200大洋以上，不过有一种据说香港分装的，只需600元，但是相对国产品牌三四百元的价格还是贵了一些。国产很多公司都有类似的Trizol试剂，价格大多三百多元，成分都差不多，可以说都是invitrogen的山寨产品。比如我用的是北京一家公司的，四百多，做出来也还不错。Taka ...