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下游纯化工艺简介Downstream（下游）与上游相对的概念，一般而言，上游指基因克隆、细胞培养等目的产物表达工序，下游指从表达有目的产物的复杂的混合液中分离纯化得到符合要求的目的产物的一系列步骤。美、日、欧等发达国家生物技术产品工业化的实践证明：生物技术产品的产业化高度依赖于基因工程下游工序技术及设备的进步。一、纯化工艺常用衔接技术：1、盐析。常采用硫酸铵、硫酸钠盐析，获得的盐析沉淀物在低温冰箱(

自我总结的Westen Blot步骤，简单实用！蛋白质的提取（整个过程冰上进行）一．组织膜蛋白裂解液 bufferA+1%蛋白酶抑制剂蛋白保存液 40%SDS+60%RIPA+1%蛋白酶抑制剂1.-80°C冰箱中取出组织放入研磨管中（研磨管和配套的研磨棒事先用去离子水冲洗，用纸吸干水)按600-700μl/100mg组织加裂解液研磨（研磨后研磨管和研磨棒用去离子水冲洗，用纸吸干水）2.用1000枪转入1.5ml离心管中4°C离心，15 ...

工欲善其事，必先利其器。对照一下，你的实验室还缺那些？（1）超声波细胞破碎机适用于5－100g湿菌体超声破碎，实验室规模用。一般可选择直径10、15、20mm的超声探头。推荐国产机器为宁波新芝。（2）高压匀浆机大规模生产用，对菌体量无限制。破菌效果好，但要注意冷却。（3）高分散乳化机均匀悬浮菌体用，比搅拌快，均匀性好，特别适合于大规模生产。另外，大规模生产时缓冲液的配制很有用，可快速溶解、混匀。推荐品牌：IKA 国产品牌：FLUKO ...

由于是新手，且前次在实验间隙整理，时间仓促，有诸多不足，现重新整理如下：SDS-PAGE前两条Marker样品弥撒原因SDS-PAGE电泳中溴酚兰指示带弥散的问题电泳时蛋白条带弥散蛋白质跑不到分离胶中SDS-PAGE怎么跑不出带？蛋白条带丢失的原因电泳快速脱色及染色从sds胶里面回收蛋白的几个相关问题SDS-PAGE电泳后可以回收再复性吗？用什么方法保存二维电泳SDS胶？SDS聚丙烯酰胺凝胶的干燥保存方法等电 ...

喷血推荐blue sliver胶体考染法！我做了2D的三块平行胶，一个一般考染，一个blue sliver，一个银染（如图从左到右），我想不用我多解释什么了吧？！！愿意喷血向大家汇报这种染色方法的初步尝试结果和经验！！一、先讲讲本版对这种染色方法的提出和进一步讨论过程：1、siashq大侠在“请教：2DE考染的困惑”http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=1253068&sty=1&tpg=2& ...

不知道有多少人成功用杆状病毒——昆虫细胞表达系统成功进行过蛋白表达？我最近表达一段病毒的非结构蛋白nsp-6，构建的重组Bacmid质粒经PCR鉴定正确，可是进行表达时，却未见蛋白表达，同时进行的试剂盒对照（含CAT基因的重组细胞中则有较好的表达。我听说约有70%的蛋白在原核表达系统中是不表达的，但不知道这样的情况会不会发生在我用的昆虫细胞表达系统，除了实验操作失误方面的原因，还有什么因素是不使蛋白表达的，请大 ...

这是园子里各位战友的经验或者困惑，希望对大家在研究和工作中有一定的帮助。蛋白表达？http://www.dxy.cn/bbs/thread/109985蛋白表达http://www.dxy.cn/bbs/thread/518317原核表达？http://www.dxy.cn/bbs/thread/111135基础表达？http://www.dxy.cn/bbs/thread/218210蛋白表达http://www.dxy.cn/bbs/t ...

分享我整理的56邮箱(生物相关，超过4000兆)这些书籍资料来自阿果等论坛，经本人整理，全部奉献给大家，希望大家能喜欢！！邮箱名：zhangjt1234@56.com使用方法:你先申请一个56信箱(去www.56.com申请)，登录后点击“共享资源”，填入zhangjt1234，即可看见我的电子书包括以下文件：网友共享 健与美 2005.12.17 14:13 11328.10Kb网友共享 origin中文版教程 2005.12.16 13:53 5424. ...

1 蛋白质含量测定法2 WESTERN PROTOCOL3 Western免疫印迹（Western Blot）4 蛋白质沉淀法5 蛋白质提取的方法总汇 1 蛋白质含量测定法本实验的目的是学会各种蛋白质含量的测定方法。了解各种测定方法的基本原理和优缺点。蛋白质含量测定法，是生物化学研究中最常用、最基本的分析方法之一。目前常用的有四种古老的经典方法，即定氮法，双缩尿法（Biuret法）、Folin－酚试剂法（Lowry法）和紫外吸收法。另外还有一种近十 ...

默克密理博2010年快乐“膜”术师评选活动——只要提交一个漂亮的蛋白印迹图(WB)，即有机会赢取iPOD大奖!　　　活动期间，跟帖发表最新westernblot蛋白印迹图即可参赛，赢得实物奖品，如果投票结果进入六甲，就有机会拿到超炫的 iPod shuffle MP3，快快行动吧！参加投票者都有机会赢得高灵敏度WB显色液和精美小礼品一份！（大奖以实物为准）默克密理博2010年快乐“膜”术师评选活动自2010.10.12启动以来，从“作品提交 ...

论坛里发的都是关于细胞的免疫共沉淀的实验方法,这是我做组织时用到的方法,希望能给大家有点帮助实验方法如下:第一步：制备组织裂解物1. 把组织剪切成细小的碎片。2. 融解Western及IP细胞裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。3. 按照每20毫克组织加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当 ...

蛋白质从SDS聚丙烯酰胺凝胶转移至硝酸纤维素膜（湿式转膜）1）SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳结束后，小心取出带有凝胶的玻板，用割胶刀沿下边缘小心撬开短板，按样品的多少切下合适大小的凝胶。浸泡在转膜缓冲液中5分钟左右，以平衡离子强度。视情况决定是否切角标记。 2）电用结束前，应泡好3M滤纸2-6张均可（普通滤纸也可）和1张硝酸纤维素滤膜。 3）戴上手套按如下顺序安装转移装置： a.平放底部电极（阴极），放一张海绵垫片。 b.在海绵垫片上放置1- ...

1. 参考书推荐A. 对初学者看什么资料比较好？解答：《抗体技术实验指南》和Antibodies（a laboratory manual， wrote by Ed Harlow ，david lane）两本书不错。2. 针对样品的常见问题B. 做线粒体膜UCP2蛋白的Western Blot （以下简写成Western Blot），提取线粒体后冻存（未加蛋白酶抑制剂），用的博士德的一抗，开始还有点痕迹，现在越来越差，上样量已加到120μg，换了个santa cloz的一抗仍不行。是 ...

最近做了CHIP，用Q-PCR方法进行定量分析，现将我对一些文献资料的总结传上，希望对大家有帮助！i. Normalizeeach ChIP DNA fractions’ Ct value to the Input DNA fraction Ct valuefor the same qPCR Assay (ΔCt) to account forchromatin sample preparationdifferences.ΔCt = (Ct - (Ct -Log2 (Input Dilution Factor)))Where, Inp ...

蛋白质技术中常常要用到lysis buffer，各个实验室的lysis buffer的配方是不同的，开设个专题，希望大家详细谈谈自己使用的lysis buffer的配方，以及各个组成成分的作用，方便广大蛋白质战友。先介绍一下我们用的：PBS缓冲液，不用多说；TRITON X-100Triton X-100中文名为曲拉通X-100，分子式为t-Oct-C6H4-(OCH2CH2)xOH, x=9-10，平均分子量为647。 常用的非离子性去垢剂，主要 ...

1.GST-Pull-Down原理http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/3828600_0.htmlhttp://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/1168462_0.htmlhttp://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/1197579_0.html2.GST-Pull-Down试剂盒购买http://www.dxy. ...

在园子里看到有好多战友询问有关蛋白保存的问题，自己对于这个问题也一直模模糊糊，今天特意搜集了一下园子里有关蛋白质保存的一些有价值的帖子，希望能给各位战友提供一些方便http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/1790263_1.htmlhttp://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/4680926_1.htmlhttp://www.dxy.cn/bbs ...

General Western Blot ProtocolMany variations exist among protocols for running Western blots. These variations address all aspects of the procedure from the choice of gel buffers and membranes to transfer conditions, blocking and processing steps. The following procedure was wri ...

蛋白纯化http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/4774978_1.html 幻灯片http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/1922610_1.html 原理图蛋白纯化网站（蛋白纯化方案均有详细PDF）http://www.dxy.cn/bbs/thread/7134009纯化后制备多抗及抗体蛋白保存http://www.dxy.cn/bbs/actio ...

(^)(^)(^)(^)(^)(^)亲爱的战友，欢迎你来到丁香园 (^)(^)(^)(^)(^)(^)＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝快速了解丁香园，快速了解蛋白版－－－－从这里开始......＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝(~B丁香园的组成(~B___◇ 丁香园信息发布区 ◇(~B__◇临床医学讨论一区◇ (~B__◇临床医学讨论二区◇ (~B__◇临床医学讨论三区◇ (~B__◇临床医学讨论四区◇ (~B__◇临床医学讨论五区◇ (~B__◇ 基础医学讨论区◇ (~B__◇ 药学讨论区 ◇ (~B__◇ 生命科学讨论区 ◇ (~B___◇ 实验技术讨论区 ◇ (~B__◇ 预防医学与卫 ...