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liupeizc 请问哪位高手知道成纤维细胞的生长周期啊，更确切的是血管外膜成纤维细胞生长周期，谢谢！zhujoker 估计都没人做过，你如果需要观察其生物学功能，就自己做一次，也算原创了啊！freecell 这里有：http://www.currentprotocols.com/protocol/cb0201本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：sh ...

luming10 求助,本人用RAW264.7细胞诱导破骨细胞一直失败，96孔板，2000个细胞/孔，RANKL50ng/ml,M-CSF25ng/ml,5到6天后TRAP染色一直没有看到理想的结果，各位前辈有做过这个实验的请传授经验，培养ＲＡＷ２６４．７细胞的时候是否有些特别注意事项，如何使RAW264.7的状态达到最佳？以及关于TRAP染色有什么需要注意的，多谢xxmchappyniu 同问，最近一个同事也要做RAW的 ...

rainlijun 兄弟是做产品经理的，说的可能是外行话，请不要嘲笑:).最近在研究甘草酸苷的药理作用。发现甘草酸苷的作用机制很复杂，经典一些的作用如抗炎、抗过敏、免疫调节、抗病毒等，新发现的作用更多，比如调节血脂、血糖、抗艾滋病毒等。甘草酸在肠道代谢为甘草次酸后发挥作用。从分子生物学的水平上看，甘草次酸可以抑制磷脂酶A2的磷酸化，可以抑制NF-kB的磷酸化，可以抑制HMG蛋白的磷酸化，抑制补体的磷酸化。后来上网一搜，原来 ...

丁香果 请问miRNA表达载体与luciferase载体共转，分别用哪个载体比较好？之前用软件预测到多个可调控靶序列的miRNA，现在想要确定究竟是哪个真的有作用，构建miRNA表达载体又比较费时，有买过miRNA表达载体能否可以推荐一下?zhujoker miRNA表达载体文献上报道的是比较多，现在主要趋向于用慢病毒载体来表达miRNA。如果你需要直接买已经构建好的的miRNA表达质粒，这是很贵的，几乎都是慢病毒 ...

ccy115 大家请帮帮忙吧！我从MDCK细胞上抽提胞浆蛋白和核蛋白，胞浆蛋白浓度在0.5-1.5mg/ml 之间，核蛋白在1.0-2.5mg/ml之间，然后我各用了10ug蛋白上样量来做Western bolt检测IkB类因子和P65因子，蛋白大小在40KD到65KD之间，用的是半干转50mA,90min,转0.22UmPVDF膜后把胶拿去染色，没残留有目的条带区域蛋白，说明蛋白已经转印在膜上了，但是做了很多次了都没有曝光出条 ...

benbenlixiubo 各位战友好！请问，蛋白激酶pkc epsilon都磷酸化哪些蛋白，我最近搜了几个如N型钙离子通道1-2、2-3loop、trpv1蛋白s800，觉得应该还有其他相关蛋白，希望有这方面知识背景的同志们再指点一二!谢谢zhujoker 建议参考以下网站，因涉及内容较多，所以不在此给你阐述。http://en.wikipedia.org/wiki/Protein_kinase_Cyingshang 建议参考下面这 ...

伽利略 ...............................chenlydd 两者都有,蛋白磷酸化水平与其功能密切相关：检测其磷酸化水平可用抗磷酸化位点抗体检测。www.cellsignal.com公司有相应抗体出售。P65磷酸化位点:regulates apoptosis: S536‑pregulates cell growth: S536‑pregulates cell motility: S536‑pregulates transcription: S205‑p, T254‑p, S ...

luoqq1985 这里做基因调控区的前辈一定不少，希望能给点意见，我在研究一个基因的5‘非翻译区是否含有低氧转录因子的结合位点，前期的工作是通过软件分析该区域是否存在这个结合位点的疑似序列，然后将这疑似的序列构人到PGL-3sv40中，转染细胞，经过低氧处理（低氧转录因子会增加）检测双萤光素酶的表达变化。如果有，还可以通过突变碱基进一步确定，但是如果不存在这样的结合位点，那我构出来的这个调控区质粒，不知道还可以做 ...

shenqi0622 请问，抑制DNA的合成分为哪些方式啊，例如抑制DNA合成的相关酶类，还有什么别的方式吗freecell 经过下述途径可达到此目的：1、使合成DNA所需的4种脱氧核苷酸形成障碍2、酶活力受抑制3、使DNA模板损伤4、使启动和调控DNA合成的复制子减少5、使DNA合成所需的能量供应障碍shenqi0622 非常感谢，总结的好！shiwei0708 影响因素就可作为抑制因素吧sanshenglou 学习啦hyj ...

吾夜清心 请教：胰腺癌细胞有耐药的吗？如耐5-FU胰腺癌细胞株，耐多种药物胰腺癌细胞株我想从逆转耐药着手，有耐药的肿瘤细胞株吗？ 谢谢:Pzhujoker 胰腺癌细胞有耐药的，比如胰腺癌耐药细胞株SW1990/FU的建立、鉴定。这是采用5-氟尿嘧啶（5-FU）浓度梯度递增法建立胰腺癌耐药细胞株SW1990/FU。耐多种药物胰腺癌细胞株，耐药细胞亚株SW1990／FU和SW1990／ADM，不过好像这些耐药细胞株的建立都是用药物诱 ...

magichunter 我目前在研究一个信号通路中的各个蛋白的激活情况，主要是就采用western的方法检测每种蛋白的表达量，实验中没有采用抑制剂，就是设定了空白组，诱导凋亡组，药物保护组以及单独药物作用组。但是看到有的其他文章中使用了抑制剂，不知道像我这样没有使用抑制剂来研究信号通路的是不是可以呢，会不会在审稿的时候被人家提出来呢？谁有相关的研究经验，大家多交流交流！chenlydd 当细胞破碎的时候，蛋白水解酶就 ...

jobsyu 新手求NFkB的详细信号通路 最好是有文字解释的，谢谢大家了！我这里有图，但是看不太懂附上melodyjoson 到网上找一篇综述来看chenlydd 中文NFkB综述链接http://www.cqvip.com/qk/94846A/200706/24789525.html本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

arthur1999 :(正、反义表达载体是什么意思，我不明白，请大家赐教。不胜感激！！！freecell 正反义表达载体就是把目的基因正向或者反向插入到质粒中再转染质粒中含有正向插入目的基因的就是正义表达载体含有反向插入的就是反义表达载体arthur1999 学习，谢谢了本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

吴佰霖 将一个目的基因在细胞稳定过表达后，用芯片分析有许多细胞因子发生了改变，能证明该基因是怎么起作用的，是跟什么蛋白结合了，通过什么通路等。。。。哪位战友可以提供一些思路或一些类似的文献，谢谢！吴佰霖 谢谢版主的置顶，也希望广大战友发挥你们的宝贵意见！其实我们在看文献的时候就会发现，研究一个基因的功能，很多时候不是nockdown ，就是overexpression，然后研究细胞的形态改变，生物学功能（生长，侵袭，移动），致瘤 ...

iu_ui 请教下，Rac-1表示什么意思，是哪个通路的？看文献的时候看到写到由Rac-1介导的信号通路不知道什么意思，它是调控什么的，手头没有相关资料，来求教下，谢谢~！zhujoker Rac-1是指的是ras-related C3 botulinum toxin substrate 1，中文也叫Ras相关的C3肉毒素底物1。Rac 1基因位于人染色体7p22，其编码产物是小G蛋白Rho(Ras homologue)家族重要成员。Rac 1蛋白具有Rac ...

gingerdaming 自己看的文章基本上都是miRNA调控靶基因，那么miRNA的表达在特定组织特定时间的增高或降低，应该也受表观遗传的调控，本人看这方面的东西比较少，我现在想专注一个miR的变化，其上游和下游都想关注。下游的在准备做了，上游调控miR的方法有哪位大虾有相关经验或者文献的？能不能分享一下，谢谢！freecell http://www.sciencedirect.com/science?_ob=Artic ...

janetlee1976 我们的实验拟鉴定高盐（氯化钠刺）激后，细胞某些基因表达水平的变化。但我们按文献分别选择了50、100、125、200、500mM浓度的NaCl进行刺激（HEK293）细胞，时间分别为30min、2h、12h、24h，结果最低50mM刺激30min后，大部分细胞都漂了，不知道该怎么办了？另外，如刺激30min，对基因的表达水平会有影响吗？谢了！freecell refer to:http://www.scien ...

hyjiangshunzhi 准备做NF-kB的活性检测，不知道那位高手有详细的EMSA实验方法，谢谢！细胞因子 这里有一篇与NF-kB相关的研究文献，里面用到了EMSA方法，并有具体论述，可以参考。cww_dream 美国Signosis NF-kB filter assay，比凝胶迁移试验简单、快速 ，多个样品可在一个试验中得到分析，与基于ELISA的转录因子检测方法相比花费更少 ，二个或以上样本可同时定量分析，希望对你有用版主docto ...

davinci2008 请教一下各位高手：想证明A通过B作用于C，A→B→C。已知A对B有肯定作用，是否证明了B对C的作用，就能证明A通过B作用于C呢？谢啦！！！zhao22840718 不能，也许A可以通过其他途径作用于C。首先你要把A——C弄通，然后中间抑制B，看对C的影响。同时中间要检测B是否变化（磷酸化，或总蛋白水平等）。A对B有肯定作用，证明了B对C的作用，只能说A可能通过B作用于C。magichunter 1.先证明A可作 ...

gingerdaming 想做个关于miRNA的报告基因，打算请公司和成mimic miRNA转入细胞！请问各位高手，有哪个公司和成的这个比较好？需要自己做什么？新手上路，谢谢！zhujoker 这种问题你问一下公司就行了啊。需要你做什么啊？什么都不需要。如果说哪儿的好呢？到是可以问问大家合成过的。我推荐一个吧，就是dharmacon公司的，比较全面，也比较专业化。效果不错。gingerdaming 谢谢啦！clion007 我们有一 ...