• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        【求助】采用脂质体转染siRNA干扰链时,为什么要用无血清的培养基因稀释干扰链?

        丁香园论坛

        5827
        请问采用脂质体转染siRNA干扰链时,为什么要用无血清的培养基因稀释干扰链?
        在用该干扰链处理细胞时,培养细胞用的培养基也要用无血清的培养基吗?这样长时间(48小时或者更长时间)会对细胞造成损害吧。。。
        请问各位,用脂质体转染细胞时具体应该怎样操作?
        huiguijimo wrote:
        请问采用脂质体转染siRNA干扰链时,为什么要用无血清的培养基因稀释干扰链?
        在用该干扰链处理细胞时,培养细胞用的培养基也要用无血清的培养基吗?这样长时间(48小时或者更长时间)会对细胞造成损害吧。。。
        请问各位,用脂质体转染细胞时具体应该怎样操作?

        RNA在血清中的稳定性大大降低。无血清只在孵育和短时间的情况下,一般来说4-6小时换成有血清的培养液,如果细胞状态差,直接用有血清的培养基
        bio_vector wrote:
        RNA在血清中的稳定性大大降低。无血清只在孵育和短时间的情况下,一般来说4-6小时换成有血清的培养液,如果细胞状态差,直接用有血清的培养基


        还想问一下,如果我采用脂质体转染化学合成的siRNA的方法对某一基因进行干扰,假如想对细胞做较长时间处理(比如72小时,或96小时),48小时后需要给细胞更换培养基,换培养基时,还需要对其添加干扰链吗?还是只加培养基?
        一般瞬转的RNA干扰链的有效作用时间是多少啊?
        做实验梯度解决你的问题,这个从文献上看来是24小时可能观察到mRNA水平的改变,48小时观察到蛋白水平的改变,但是你的实验最优化的东西是你具体实验后的结果。但是换培养基是不是需要加入化学合成的siRNA也可能是针对你实验本身了,你如果在72小时甚至96小时不加mRNA水平又升高了的话,那我认为你就一次在24与48小时检测最好了。一般化学合成的siRNA的管不了72小时甚至96小时的。

        本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴

        师兄微信号:shixiongcoming

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序