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霍一刀hxs 是否有战友知道：如何查询一个基因内含子的5' splice site 和 3' splice site ？谢谢。woxingwosu 看看是否是这个？http://www.life.umd.edu/labs/mount/RNAinfo/consensus.html霍一刀hxs woxingwosu wrote:看看是否是这个？http://www.life.umd.edu/labs/mount/RNAinfo/consensus.html谢谢。祝科研顺利。 ...

三叶虫 站友们，你们好：我们准备通过RNAi技术使成骨细胞的雌激素受体不表达（或表达减少）。由于从来没有做过这方面的实验，希望各位站友能简单给我们讲述这个过程，哪些是要请公司做的，哪些需要自己操作。需要什么特别的实验设备仪器。据个人了解：1，制备一种东西，能切除特定的基因。（如何制备？如何设置阳性和阴性对照？）2，这种东西作用于细胞。（使用什么方法？）3，检测细胞的基因是否有变化（设立通过PCR,WB等。）4，还有什么其他的方法， ...

janetlee1976 我记得从前看到过检测细胞总体的蛋白质乙酰化水平的方法，大概是免疫荧光或者共聚焦显微之类的方法，现在找不到了，不知道哪位知道，请赐教（不是检测某种组蛋白或某种蛋白质的乙酰化）。可否提供参考文献？谢谢！woxingwosu 免疫荧光后再共聚焦应该是可行的，或者是western也行。目前除了蛋白特异性的乙酰化抗体以外，还有一些针对乙酰化赖氨酸（Lysine）的抗体Acetylated-Lysine An ...

genechip 我跟一个英国科学家要了腺病毒，对方答应给了，但不知道是否可以通过Fedex邮寄，海关那边会不会查，要不要申报？另外由于是我这边付费，邮寄过来大概要多少钱？genechip 有人知道吗？思路迪腺病毒 如果通过Fedex寄，那就得碰运气，海关是抽查的，抽到了，你就要官方证明等文件。另外，对方寄的时候也要官方证明，但不知对方国家是否同意邮寄这类病毒性玩意？好在腺病毒比细胞运输好，不容易死，拿来后可以立即扩增，然后重 ...

boboshining 慢病毒转染人间充质干细胞的效率是多少啊？谢谢kinguangjun 我做过用慢病毒感染人脐带血间充质干细胞和人脂肪间充质干细胞,其感染效率大概在50%～80%之间,人脐带血间充质干细胞比人脂肪间充质干细胞的感染效率要高一些.易冰 我现在也很想知道，慢病毒是不是转染有种属性质，我用构建好的慢病毒转染大鼠骨髓间充质干细胞，基本上没有多少转染成功的。本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资 ...

heward N-乙酰半胱氨酸DMEM配成50mM母液，NaOH调PH值6.8，然后稀释成10mM、5mM、2.5mM加到大鼠原代肝细胞中，即使不加肝损伤药，单加N-乙酰半胱氨酸，细胞的存活率也在降，与药合用后细胞存活率降得更多，为什么？请教高手，NAC不是对肝损伤有保护作用么？怎么按照上面的方法加了下反而增加毒性？kern6549 不知道你说的单加NAC细胞的存活率也在降的结果是怎么得出来的？有没有设置NAC浓度为0的对 ...

neuroclong 谁能告诉我一下casepase-independent cell death有哪些，查了相关文献查不到，我写东西到最关键的地方，就是差找个了，急啊急，有哪个高人给我讲一下吧kern6549 个人意见，仅供参考：caspase-dependent cell death应该指的就是凋亡吧。那么caspase-independent cell death可能就是除了凋亡外的细胞死亡，如坏死，自噬等。neuroclong 当然是凋亡 ...

xjcaoliqiong 各位战友，IL-10等细胞因子在组织中检测能否不经过培养，直接匀浆提上清液做免疫组化？刚刚接触实验的新手衷心请教，谢谢！kern6549 两种方法：1、免疫组化检测IL-10。2、组织匀浆ELISA检测IL-10。请不要相混，匀浆还怎么做免疫组化。xjcaoliqiong 谢谢了！zaiju512 呵呵非专业选手wuushark 细胞提cdna，QT-PCR也可以测。本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意 ...

zcy20002001 请问上海哪里有可以做细胞低氧培养的地方，本人想做低氧条件下细胞的信号转导，谢谢！j19s87x 有意可以联系我QQ：59405497 以前做过，也在上海zcy20002001 没有QQ号，请问你在上海哪个大学或研究所，或者留一个msn细胞超人 现在很多人都在作信号转导 ，我女朋友博士课题也是在做，挺麻烦的，要做很长时间常能出结果，你去别人那儿做是啥意思，花钱用人家设备，还是跟他们老师合作。北京这边很多也是做低 ...

wachjun2000 请教各位高手，我最近打算做药物对肾脏疾病NF-KB信号通路的干预作用，想用Western Blot测定NF-KB p65活性。但是我在查文献及抗体的时候发现以下几个问题：1、NF-KB p65存在不存在磷酸化？如果不存在磷酸化为什么抗体公司用磷酸化抗体？2、一些国外的文献NF-KB p65活性测定采用的是普通的抗体，也有文献采用的是磷酸化的抗体，所以很不理解。园子的朋友说p65活化后入核，所以测核内普通的NF ...

清泉煎 本人研究生即将学习生物化学与分子生物学，本科还没有基础，求高手指点，现在应该做好什么准备工作freecell 先买一本本科的教材，仔细自学一下。pengqianjin 以我的经验，最后买这些教材：无机化学、有机化学、生物化学，真正静下心来好好研读，一般3个月就差不多了。无机化学是比较基础的，跟高中学的化学有一定联系。有机化学又是以无机化学为基础。devil19840 用不着从无机化学、有机化学开始学，直接拿一本权威的生物 ...

wachjun2000 请教各位高手！我最近打算做药物对肾脏疾病NF-KB信号通路的干预作用，想用Western Blot测定NF-KB p65活性。但是我在查文献及抗体的时候发现以下几个问题：1、NF-KB p65存在不存在磷酸化？如果不存在磷酸化为什么抗体公司用磷酸化抗体？2、一些国外的文献NF-KB p65活性测定采用的是普通的抗体，也有文献采用的是磷酸化的抗体，所以很不理解。园子的朋友说p65活化后入核，所以测核内普通的NF ...

第一号 园子里的各位战友及版主：本人在做抑制ＭＡＰＫ通道，对甲状腺癌细胞分化的影响。使用的抑制剂是U0126，按照文献报道，浓度是10um。但在加药后24h,可见细胞大量的漂浮（已排除污染），而国外文献报道，U0126要持续作用5天，且每天更换新液。请问，U0126对细胞有无毒性？为何我的细胞在作用24h后就见大量死亡？各位战友及版主能帮我分析分析吗？苍茫云海间 当然有毒，要做一剂量效应实验， dose-dependent effe ...

janetlee1976 在构建萤光素酶报告基因载体的过程中，我把一个基因的一部分启动子插入到载体中（包含该基因转录起始点），请问是否需要为了避免载体中编码萤光素酶的基因的移码突变，而在转录起始点以下所包含的碱基数必须为3的整倍数呢？比如所包含启动子区域为-1000！~+27（此处是否必须为3的整倍数）woxingwosu 我觉得只要从翻译开始，即ATG， 保持碱基数必须为3的整倍数就可以了。前面的启动子部分没有必要。最好要 ...

jianglitcm 我们的试验中要给180-220g大鼠侧脑室注射H89以阻断Pka再观察药物的抗抑郁作用，我之前查到的文献中只有小鼠海马注射H89的量，为5.19ug/ul，那么大鼠的注射剂量如何定？注射5ul够吗？另外，我需要用药物治疗三周，那么H89是这三周内都要给药还是在治疗前给一次就够了呢？向各位专家大侠赐教！感激不尽！鱼cynthia 麻烦问一下 你的H89是用什么稀释的chenlinghezzx 应该是先用D ...

ontheway361 最近的实验想从细胞中提取RNA，然后进行逆转录PCR从而测定细胞中bcl-2的表达，进而探讨凋亡的机制。可是该过程中遇到一棘手问题：我对细胞进行干预后，按照trizol试剂盒提取RNA说明，加入trizol液之前要先吸去培养液；然而，此过程中肯定不可避免地将凋亡细胞吸掉了，那么请问各位前辈，这样做的话是否会影响后续结果，从而影响对RNA表达的误判呢？还有一点，请问bcl-2，caspase-3 ...

beingconfident 最近做慢病毒感染细胞，慢病毒载体是自己包装的，含有筛选基因，marker基因，还有目的基因。第一次做筛选基因是G418，但是可见部分细胞表达marker基因，但是加药筛选不死，最后检测目的基因有表达。很奇怪。后来重做将筛选基因换成Hygromycin，感染48h小时加药，细胞死亡明显，最后形成单克隆，但是没有看到marker基因的表达，测目的基因有表达，两次结果都有些戏剧性。总结起来我的 ...

shuru214004 如何查找一个基因的启动子和5端非翻译区，以及怎么确定+1的位置？我用UCSC和ensembl这两个网站找出来的非翻译区一致，+1的位置也找出来了，可是这个基因跟国外报道的+1位置却相差10-20个碱基左右。为什么呢？用这两个网站找出来的非翻译区可信度有多大？lmnsmu 启动子位于DNA序列上；5端非翻译区在mRNA序列上，目前明确的基因在各种核酸数据库中均标明CDS（编码序列）的位置，第一个CD ...

lantianshi 在网上查到转录起始位点通常为一个嘌呤，就是说不是一个A就是一个G。而记着好像分子生物学上曾经给过序列特征，是ANTA(G)....,有确切了解这个序列特征的同学或者老师吗？请解答一下！lmnsmu 转录起始位点是指合成RNA的第一个核苷酸所对应的模板序列，RNA的第一位即5'-端总是GTP或ATP，GTP更常见。那么转录起始位点应该是C或T序列，但是不是所有的C或T是起始位点，一般是存在于特征性序列中 ...

sharon_yin 现在手头有一批病人的血清和血浆，想做些什么，不知道最近有什么比较火的？？zhujoker 多看看nature，cell，sience，你可能就知道到可以做点什么了？LoftyMan 都是些什么狗血的问题和回答啊，你手上有菜刀就能表示你刀工出神入化可以在最新的电视节目上亮相，做梦吧看几篇Nature就能知道怎么做，做梦吧版主zhujoker留言:请您在回答问题时更加注重问题的本身!sharon_yin 你们 ...