【求助】DNA甲基化如何定量分析？
丁香园论坛
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各位前辈好！
刚开始做这方面的研究，想做MSP检测甲基化。请各位前辈若何进行定量检测？
非常感谢！！
刚开始做这方面的研究，想做MSP检测甲基化。请各位前辈若何进行定量检测？
非常感谢！！
MS-HRM方法 是一种新的定量检测甲基化的方法 ,它是基于亚硫酸盐对DNA进行修饰后具有不同的碱基构成,导致甲基化和非甲基化模板扩增后的产物热稳定性不同而进行检测
sunside wrote:
各位前辈好！
刚开始做这方面的研究，想做MSP检测甲基化。请各位前辈若何进行定量检测？
非常感谢！！
MSP本身只是一项定性的技术，且本身存在假阳性和假阴性缺陷。如果要对某一特定基因启动子的某些CpG位点甲基化率定量，可以考虑BSP。
zhujoker wrote:
MS-HRM方法 是一种新的定量检测甲基化的方法 ,它是基于亚硫酸盐对DNA进行修饰后具有不同的碱基构成,导致甲基化和非甲基化模板扩增后的产物热稳定性不同而进行检测
您好，请问HRM是不是对仪器要求较高，一般实验室可以做吗？
MSP本身只是一项定性的技术，且本身存在假阳性和假阴性缺陷。如果要对某一特定基因启动子的某些CpG位点甲基化率定量，可以考虑BSP。
您好，请问BSP费用高吗？我做的是大量的血液样本。
sunside wrote:
MSP本身只是一项定性的技术，且本身存在假阳性和假阴性缺陷。如果要对某一特定基因启动子的某些CpG位点甲基化率定量，可以考虑BSP。
您好，请问BSP费用高吗？我做的是大量的血液样本。
BSP费用不算高，但是比较耗时费力，不适合检测临床大样本。建议你再多查询相关文献，找到适合你课题的方法。
用焦磷酸测序也可。
附件有方法。
附件有方法。
半定量做结合重亚硫酸盐的限制性内切酶法(Combined Bisulfite Restriction Analysis,COBRA)也可
需要PCR技术和凝胶电泳分析。
需要PCR技术和凝胶电泳分析。
HRM对机器的要求较高，比如用QIAGEN的Rotor-Gene Q（Corbett Rotor-Gene 6000）。配合饱和染料有LC Green，LC Green Plus，SYTO 9和Eva Green。
有了仪器方法不难，难在内参质控的制作和结果分析。有一篇文章作为参考。
有了仪器方法不难，难在内参质控的制作和结果分析。有一篇文章作为参考。
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