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flhua 今天看文献，看到有人用这样MycHis-tagged载体，不知是何原理，请大家解释一下。这是我刚才查到的内容：“载体名称：pcDNA3.1/myc-His载体类型：哺乳动物细胞表达载体: 载体大小：5.5kb (5493 bp)载体宿主：大肠杆菌，哺乳动物细胞（E.coli, Mammalian cells）细菌抗性：氨苄西林（Ampicillin）真核筛选标记：新霉素（Neomycin）5' 测序引物：T7 prime3' 测序引物：BGH primer ...

candyjiang 1.知道某启动子序列用什么方法将其克隆出来？2.将启动子碱基数太多，如何将其中某一段已知序列克隆？cedar1985 设计引物,PCRcandyjiang 序列太长了，有5000多个碱基，那我是要把我启动子的其中一段用PCR扩增出来？？模板从cDNA文库中调取？？我们自己实验室没有cDNA文库，找哪个公司做比较好（广州）thltyz 启动子没有在cDNA文库中，在genomic DNA中，用DNA为模板才能扩出来 ...

豪斯 请问版内高手一个问题，目前有哪些机制可以在上游调节miR，有没有相关的文献，谢谢LoftyMan 基本的就是RNA polymerase II吧，其他的一开始分为cellular和viral好学习一些这么火爆的话题，在Nature搜索一下microRNA的Review就行了，08年Bryan R. Cullen有一篇，最近他又有一篇新的所谓上游的调控，这个问题我觉得可能比发现miRNA的新target更难，建议楼主暂时不要考 ...

lingwu 本人做WB检测加入因子后p-AKT的变化，结果显示15分钟和30分钟条带叫空白组弱，而到60分钟条带开始增强，6小时达到高峰（较空白组高），这种情况是不是表明因子能够激活p-AKT？是不是一种迟发的激活方式，其上游是不是还有其他的信号转导过程？zhanghai123 总AKT是否也增高了？kern6549 建议重复实验，如果确实得到先弱后强的结果。个人认为加入你的因子后AKT的磷酸化过程可能比较复杂，不能简单 ...

proteining 如题，我的实验是缺氧复氧处理脐静脉内皮细胞，一组实验细胞给予适当剂量的P38抑制剂SB203580，在进行缺氧复氧，另外一组不加直接缺氧复氧处理，（另外组此处略去），我得出的结论是加入SB203580预处理的组，其磷酸化的P38的水平显著低于未加SB203580组，也就是它可以抑制P38的磷酸化，我看国内外大部分的实验也是得出的中国结论，但是审稿人却找出了一篇99年BBRC的文献，来质疑我的 ...

凉石榴 譬如说 hsa-mir-196 这个hsa是什么意思呢 ？woxingwosu 呵呵，这个应该是代表物种吧。 hsa代表Homo sapiens （人）。zjubell 凉石榴 wrote:譬如说 hsa-mir-196 这个hsa是什么意思呢 ？贴一下常用的脊椎动物的：另附一份所有的Homo sapiens (human) hsaPan troglodytes (chimpanzee) ptrMacaca mulatta (rhesus monkey) mccMus musculus (mouse) m ...

海之泪 有做过ChIP的高手不？我用冷泉港提供的protocol（http://cshprotocols.cshlp.org/cgi/content/full/2009/9/pdb.prot5279#R42）1. Add 27 μL of 37% formaldehyde per milliliter of cell culture (in growth medium on tissue culture plates or in tissue culture flasks) while slowly shaking the ce ...

xcydcg 我现在搜集全血标本，想要提取RNA，但是由于临床标本搜集较难，所以想要先保存然后一起提。请教各位高手应该怎么保存血标本呢？如果标本放在4°后多长时间就必须放在零下八十保存。如果我先前用triton处理过细胞，是不是就提不出RNA了？谢谢各位指导。北京rnai 前一段时间提过全血，是用tirzol提的，但是效果不是很好，一种方法是采血后直接-80冻存，提的时候加trizol另外一种是用淋巴分离液分离后提的，效 ...

师赠王老吉 在提取血中DNA时，细胞裂解液是指？平常的细胞裂解液，还是白细胞或者红细胞的裂解液？liushan8_9 白细胞或者红细胞的细胞膜应该是一样的吧。yyf87255300 在提取外周血DNA时，成熟的红细胞内没有核，所以裂解的外周血的白细胞，我们实验室用的裂解液是三蒸水zjubell 师赠王老吉 wrote:在提取血中DNA时，细胞裂解液是指？平常的细胞裂解液，还是白细胞或者红细胞的裂解液？看你这个词是出现在哪的。如果你 ...

xcydcg 我现在搜集全血标本，想要提取RNA，但是由于临床标本搜集较难，所以想要先保存然后一起提。请教各位高手应该怎么保存血标本呢？如果标本放在4°后多长时间就必须放在零下八十保存。如果我先前用triton处理过细胞，是不是就提不出RNA了？谢谢各位指导。zhujoker 首先请你珍惜你的标本，还有就是一个问题，一般我们所谓的血指的是血清样本，建议血液立即处理，因为不处理的话会出现以下几种情况：1，溶血；2，RNA的降 ...

谁似我醉扬州 我想证明某种药物诱导成骨与经典Wnt通路有关，实验应该怎么设计？需要测哪几个指标？cyclin 特异性抑制剂阻断wnt通路中的一些关键性分子，看药物处理对成骨的影响，以及检测药物诱导是否会激活wnt通路中的关键分子j19s87x 我们公司可以为你做完整个课题，有需要联系QQ：594051497本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号： ...

yn850307 请大家帮忙提供G418筛选的具体步骤和注意事项。谢谢！zhujoker 筛选之前确定G418浓度：1，由于每种细胞对G418的敏感性不同，而且不同的厂家生产的G418有效成分的比重不同，一般1g的粉剂中有效的G418含量大约为0.722g。2，G418是新霉素的类似物，两者都是通过抑制核糖体的功能和蛋白质的合成而杀死细胞的。但是新霉素对真核细胞无作用而G418对细菌和真核细胞都起作用。neo就是编码 ...

香溢 免疫组化, FISH, CGH, LOH, MSI, 克隆性重排等的应用范围及应用”盲点”。请教各位高手，这个题目怎么回答？马上就要考试啦，答不出来，太难了！！谢谢minmin4003 同问啊~~~illusionistx 大家都是校友……ellem 免疫组化的应用范围答：（1）提高病理诊断准确性（2）对疾病的预后和治疗的意义（3）癌基因蛋白的应用（4）对肿瘤增生程度的评价 ki67 PCNA（5）微小病灶的发现 微小癌 微小病灶（如羊水栓塞）（6）在肿瘤分期上的意义（7）指导 ...

qxxie215 这几天在做基因拼接，看的文章不多，但是发现这个拼接的linker有不同：（G4S）n和（S4G)n两种，哪位高手解释一下，这两个有什么区别？谢谢！zjubell 发现这么多天了回复仍然是0.主要是lz的问题根本很难看懂。什么叫基因拼接？是两个基因拼成假基因？重排？还是测序后的序列拼接？woxingwosu 最好还是把原始文献弄出来看看吧？（G4S）n和（S4G)n这两个东西连google都查不到呀。。。qxxie2 ...

泌外医师小李 在培养液中加入a蛋白质可以提高骨髓基质干细胞向软骨细胞分化的分化率，但a蛋白质使用周期长且价格昂贵，请用基因工程解决这个问题。小弟无才，在此请教各位高手，望不吝赐教，谢谢！woxingwosu 估计是要自己克隆表达蛋白吧。zhujoker 你如果是应试，在这儿找不到什么好的答案的。这个问题你还不要说，即使是做原核表达，还不定能够做到你想要的那种纯度以及质量，建议你如果不是专业性的实验员，你还是在其他方面省省， ...

xcydcg 各位大虾：本人近期想做miroRNA方面的试验，想请教各位哪些公司做这方面比较强，北京有没有，还有，大家觉得芯片哪些比较好呢？谢谢各位了:)版主freecell留言:当然是ABI的较好一些，自己搜搜就能找到的啊！或者找个销售员问问就清楚了吧！xujian2004265 你是做哪方面的？xcydcg 好，谢谢各位了。我主要想代理一个公司帮忙做有关miRNA的东西，所以想看看各位有没有什么经验，哪家公司做的比较好。h ...

newchaoren race 怎么做啊woxingwosu 下面是wiki的介绍资料，我想你可以参考一下。另外两个protocol给你看看，不过条件需要自己摸索的哦。RACE, or Rapid Amplification of cDNA Ends, is a technique used in molecular biology to obtain the full length sequence of an RNA transcript found within a cell. RACE results in the producti ...

sunside 各位前辈好！刚开始做这方面的研究，想做MSP检测甲基化。请各位前辈若何进行定量检测？非常感谢！！zhujoker MS-HRM方法 是一种新的定量检测甲基化的方法 ,它是基于亚硫酸盐对DNA进行修饰后具有不同的碱基构成,导致甲基化和非甲基化模板扩增后的产物热稳定性不同而进行检测zitong1983 sunside wrote:各位前辈好！刚开始做这方面的研究，想做MSP检测甲基化。请各位前辈若何进行定量检测？非常感谢！ ...

xxshc 我有A蛋白的转基因鼠和对照鼠。想证明A蛋白参与anti CD3激活的T细胞受体TCR信号通路。TCR激活后可以激活ras，MEKK,MEKKK等。是不是我首先看各通路下游的蛋白磷酸化水平在两种鼠之间有无差异。有差异再向上寻找？是可以通过这个初步筛选吗？第一次做信号通路，希望得到大家的帮助。谢谢！kern6549 先不要找参与哪一条通道，先要确定是否参与anti CD3激活的T细胞受体TCR信号通道。可以用常规的活 ...

smu 各位战友：最近我在搜索一个真核基因的启动子区，然后在启动子区寻找一个转录因子的结合位点，我找了转录起始点的上游2000bp至转录起始点下游200bp，结果在转录起始点下游150bp附近看到一个结合位点，请问战友们：转录因子的结合位点可以在转录起始点下游吗？谢谢各位大侠！kinguangjun 转录因子的结合位点有些是在转录起始位点的下游smu 谢谢，一般下游多少范围呢？zitong1983 转录因子的结合位点可以在 ...