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谁似我醉扬州 我做的是与wnt信号通路有关的，想了解某种药物诱导成骨是否和wnt信号通路有关，如果加药后β-catenin，LEF、CyclinD增加可否说明wnt信号通路被激活？β-catenin用的是western blot方法测定核内的，LEF、CyclinD用的是PCR的方法，这样设计实验合理吗？各位高手请帮帮忙，谢谢！谁似我醉扬州 怎么没人回答呢？丁香园不是很多高手吗？自己顶！ghy0601 现在所谓的核蛋白提取试剂盒 ...

baiguo861029 各位前辈好 本人是个新手，听很多师兄师姐说丁香园很好，这儿的人都很热情帮助他人。我现在研究生在读，因为课题需要，急需购买这个质粒pBV889，试了好多方法都没找到。这个质粒含有人干扰素alpha-2b编码序列，即cDNA序列。非常希望知道的前辈给予我帮助，非常感谢！！woxingwosu 用google搜索了一下，发现很多文章都有，国内发表的也很多。其实你或者你老板可以写信去要一下就方便多了，还不用 ...

花樱雨 :~)我用进口试剂盒提取人新鲜全血的DNA 放置-20℃保存了2天后 室温下解冻 进行琼脂糖凝胶电泳，结果做了几次都出下一下的情况：1.maker总是出现类似月牙的牙齿形状 两边比较高 中间是空的 不知道是怎么回事？请高手指点我一下 不胜感激2.maker 最高的条带是2000bp 人DNA跑胶的结果总是比maker最高条带高一点的 大家有没有正确的人类DNA跑胶的照片 能不能发给小妹看看 我真是急死了以下附带我的电泳图zjubell 你的DNA提的没 ...

hexi1985 各位战友，我想请教下PD98059使用问题。本人准备做大鼠动物实验，使用PD98059干预，但是参照文献都说1mg/kg溶解于DMSO中，分装保存，用时再用PBS稀释。可是文献里又提到DMSO浓度不超过0.1%容积比率。如果我按照文献以1mgPD溶解于1ml纯DMSO中，再稀释稀释1000倍来达到DMSO的0.1%浓度，就根本达不到我想要的50微mol/l的终浓度了，而且总的液体量达到1升，每只大鼠我 ...

wuxinkaoyan 大家好：　我有几个关于实验的问题向您请教下！希望您给予指导！谢谢！１、简单介绍下我现在要做的实验，我们用的是micrRNA，序列如下：microRNA-15-a: 5'-UAGCAGCACAUAAUGGUUUGUG-3'microRNA-16-1: 5'-UAGCAGCACGUAAAUAUUGGCG-3’按照文献上说的，为了增强稳定性，我们合成了其互补链，做转染的时候用的是双链，转染到细胞质后，其会自动降解成单链，然 ...

refrigritor2005 弱弱地问：所有的mRNA都在细胞浆里吗？即使其翻译（？）的蛋白质位于细胞核内？woxingwosu mRNA本身应该是在细胞核中合成的（少量在线粒体中），成熟后才转运到细胞浆（cytoplasm）里面去，所以说不可能所有的mRNA都在细胞浆里面。而且真核的mRNA必须通过核孔转运到细胞浆并且在细胞浆才能进行翻译。翻译的蛋白质能在细胞核中有一部分是由于这个蛋白质含有核定位序列（NLS, nucl ...

znsdavid 抗体，是我们非常熟悉的一种生物试剂， 但我们对抗体的鉴定，选择又了解多少呢某著名抗体公司的科学家在行业内提出全新的抗体选择标准“PASS”。通过客观的参数指标和专家的观点，科研人员只需要仔细的阅读抗体的说明书，再结合 “PASS”的抗体选择标准，就可以在一定程度上自己鉴定选择抗体的品质。“PASS”抗体选择标准是指科研人员在选择抗体的时候，应留意抗体说明书中抗体纯化工艺（Purification），抗原信息（ ...

霍一刀hxs 如何由已知蛋白查询其调控的基因？已知一个蛋白质，通过哪些方法可以查询其调控的基因？谢谢。woxingwosu 比较直接的是察看看这个蛋白是否含有与潜在的DNA结合（特别是promoter）的区域，然后做一下real time或reporter assay等验证一下，有效果就可以通过点突变等进一步验证。如果要大范围的筛选受其调控的基因，需要microarray或者2D吧，我想。zjubell 呵呵，这个是最典型的免疫 ...

zhaozhuozhao 各位老师，MAPK抑制剂如何使用，是在刺激因子之前预孵育一段时间后弃去再加刺激or在刺激因子之前预孵育一段时间不弃去直接加刺激orS直接与刺激共孵育？感谢您的解答，谢谢！kern6549 同时加就可以。zhaozhuozhao 请问一下哪种效果更好呢？因为我的刺激要持续24h，我怕先用抑制剂孵育完后弃去再加刺激24h，抑制剂的作用早就没了，您说呢？kern6549 不是说了同时加吗？zhaozhuo ...

taijiwu 给一个靶基因，经证实已发现有一种及其以上的miRNA可以调控此靶基因，如何根据这几种miRNA及其靶基因来删选新的miRNA!以减少假阳性率！纠结中，还请高人帮忙！woxingwosu 如果不多的话，就一个个试？taijiwu 二楼的方法不好，一个一个试得花多长时间啊，等找到相关的miRNAb别人可能文章都出几篇了，况且还浪费那么多的资金!不可取LoftyMan LZ有毛病？二楼的方法是截至现在唯一实用的方法， ...

陆军鱼 小弟通过转化感受态扩增pGL-3 Basic、control，pRL-SV40三种购买来的质粒，小提后电泳检验一下扩增的成果，结果让我不太理解，为什么质粒大条带后面还有“杂带”呢？12道，34道，56道都是从一块板上挑的两个单克隆，两个道的质粒在相应的位置都有杂带感受态经抗生素板检验没有污染不知道这样的杂带怎么解释？woxingwosu 这个可能是正常的吧（除了3和4有点怪怪的以外，建议再重新跑胶或者重新提质粒看看） ...

gaoxiaomeng :^)woxingwosu 基因是不是可以简单理解为从ATG到终止密码子为止？如果是这样，那就没有多少选择，直接就是Forward: ATGNNNNNNReverse: STOP CODON NNNNN (注意要互补的~~)zjubell woxingwosu wrote:基因是不是可以简单理解为从ATG到终止密码子为止？如果是这样，那就没有多少选择，直接就是Forward: ATGNNNNNNReverse: STOP CODON NNN ...

tianjiaoya PJ694α (MATa trp1-901 leu2-3,112, ura3-52, his3-200, gal4Δ, gal80Δ, LYS2 ∷GAL1-HIS3, GAL2-ADE2, met2∷GAL7-lacZ).gingivalis Check here:http://www.yeastgenome.org/alleletable.shtml%22dnazyme 对，分段查看就懂了，例如，MATa是结合型， Δ意味着缺失突变。本文由丁香园论坛提供，想了解更多 ...

whiteswan 本人按文章要求，将1mg SP600125溶于125ul DMSO成透明溶液，然后将上述125ul溶液添加于1375ul PBS,有絮状沉淀析出，请高手帮忙指点解决该沉淀析出问题，谢谢！whiteswan 似乎应该xiemengxipan 请问楼主的实验做完了没，能否传授点经验给我呀，我也在做这个实验，方便的话留个QQ交流下。不安分得土壤 xiemengxipan wrote:请问楼主的实验做完了没，能否传授点经验给我呀 ...

tianjiaoya 我想构建一个真核表达质粒，用这个真核表达质粒来表达绿色荧光蛋白，但是我想让绿色荧光蛋白的表达受酵母菌GLA4转录因子的调控，也就是说有GLA4存在，这个质粒就表达绿色荧光蛋白，没有GLA4存在，就不表达绿色荧光蛋白。当然需要对真核表达质粒上的启动子做相应的调整，但是我现在的问题是，转录因子GLA4能不能对质粒上有相应调控元件的表达盒，进行调控？据说GLA4上有核定位元件，要是将这个核定位序列 ...

silencemm1015 请问，我怎样才能知道TS,TP,MTHFR,DHFR这几个酶的基因突变频率？如何去查相关文献？在哪查？谢谢！woxingwosu 最好写的具体以一点吧。。。NCBI上查一查也应该能够搞定的，只要关键词搜索得当的话。silencemm1015 谢谢！但是查不到想要的东西woxingwosu 呵呵，NCBI上都查不到的话，估计就是还没有人做了。。。silencemm1015 可能还是关键词用的不当吧。我再查查看， ...

taijiwu 据文献报道，miRNA可以降解或抑制靶基因的翻译，是否还有其他调节方式，能否可以促进靶基因的稳定，还请高人回答路得自己走 taijiwu wrote:据文献报道，miRNA可以降解或抑制靶基因的翻译，是否还有其他调节方式，能否可以促进靶基因的稳定，还请高人回答路得自己走 taijiwu wrote:据文献报道，miRNA可以降解或抑制靶基因的翻译，是否还有其他调节方式，能否可以促进靶基因的稳定，还请高人回答不知是否 ...

w_dennis 请教各位高人前辈，有做过基因的部分核苷酸缺失后，回补株构建实验吗？如何操作？请教下pBAD/gⅢ和pBR322质粒构建回补株的原理？叩谢！！:)woxingwosu 看看这个有没有帮助了：http://journal.shouxi.net/qikan/article.php?id=534304w_dennis 谢谢，请问有pBAD/gⅢ和pBR322质粒的信息吗？本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以 ...

taijiwu 我测了一段miRNA的种子序列，如何查找它存在于哪一段基因的区域内，BLAST、miRBase、TargeScan如何使用，还请各位战友提供帮助。谢谢！woxingwosu 有了目的序列后这个我想BLAST应该可以出来了吧。具体做法你自己摸索估计比让人在网上教更快。当然什么具体问题可以提出来。mirbase和targetscan也是一样。下面的连接是NCBI的中文教程，希望对你有所帮助。http://bi ...

taijiwu 给一个miRNA极其序列，如何查找它的转录起始位置，存在于哪个基因片段的内含子区域。请高人指点。霍一刀hxs taijiwu wrote:给一个miRNA极其序列，如何查找它的转录起始位置，存在于哪个基因片段的内含子区域。请高人指点。这两个网址。http://www.mirbase.org/http://biochemistry.dxy.cn/bbs/topic/15429796?tpg=1&age=0taijiwu 能否介 ...