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        【求助】我的人全血D提取DNA后跑的凝胶电泳图是怎么啦?

        丁香园论坛

        10572
        :~)我用进口试剂盒提取人新鲜全血的DNA 放置-20℃保存了2天后 室温下解冻 进行琼脂糖凝胶电泳,结果做了几次都出下一下的情况:
        1.maker总是出现类似月牙的牙齿形状 两边比较高 中间是空的 不知道是怎么回事?请高手指点我一下 不胜感激
        2.maker 最高的条带是2000bp 人DNA跑胶的结果总是比maker最高条带高一点的 大家有没有正确的人类DNA跑胶的照片 能不能发给小妹看看 我真是急死了

        以下附带我的电泳图
        【求助】我的人全血D提取DNA后跑的凝胶电泳图是怎么啦?
        你的DNA提的没问题,但你的胶跑的有问题。
        你该不会是用水配的胶吧?
        感觉是胶和电泳液的离子浓度不一致导致的。
        你用的是DL2000吧?建议重新做胶,再跑一次。
        全血的DNA,就是普通的基因组DNA,条带一般比较大,没什么特别的。
        应该不会是dna或者marker的问题,猜测可能是与琼脂糖胶的配制有关,建议你用2%的胶,充分加热溶解后配制试试看。
        你好!我以前也有过这样的情况,后面分析是:电泳时间长了些,胶有问题(如果是做了几次都是这样,那就是琼脂糖的原因了)
        同意以上几位战友的看法,应该不是DNA问题,是电泳的问题。
        可以这样看,如果你的Maker跑的很好,但提的DNA跑不好,就是DNA的问题。
        建议你把电泳缓冲液换掉,重新做个1.5%-2%的胶,电泳时恒压90V,跑20—25min。试试看。
        最主要的是人类DNA应该很大啊 我的条带的位置是不是很不合理呢 是不是应该在加样孔附近呢?谢谢了
        哪位高手跑过人类DNA的琼脂糖凝胶电泳图 能不能发给小妹看看呢 我没有见过啊
        你的其实就是电泳没跑好。
        我电脑里随便找了一张。其实也不算是好的。
        凑合一下吧。左边还有很多可能蛋白污染。
        没跑出孔道的,不能说明是好,很可能是组蛋白与DNA 结合在一起,跑不出来了。
        右边那些反而好。条带么,在2Kb以上,基本上有4K左右了吧。
        跟你的位置差不多。但我的marker跑的比你好一点吧,呵呵
        【求助】我的人全血D提取DNA后跑的凝胶电泳图是怎么啦?
        拜托啦 各位!
        谢谢zjubell! 谢谢您!如果还有人有图帮我解答疑惑我非常感谢!
        zjubell,请问您 您的maker用的是dl2000吗?您的maker最上面的条带是多大?您用的是什么试剂盒呢 是不是从人全血中提取的DNA?胶是不是1%的琼脂糖凝胶?电泳时用的电压电流多大 时间多长?您看过我这张图吗 我的maker是月牙中空的,是不是和操作有关呢?我要做AFLP跑成这样是不是有影响?
        问题比较多 不好意思 谢谢您!
        我在邮件中已经有回答你的问题。
        我用DL2000,最上面的自然是2Kb,用的是qiagen的kit。是从全血中提的DNA。胶浓度忘了,一般是随意加的,量了100mlTAE,随便抖点琼指糖进去,大概1-1.3g吧。电压和电流跟型号有关系。我用100V也跑,有时候为了赶时间,直接用400V去跑。

        你现在的问题并不是用什么试剂盒提DNA。
        而是先把marker跑跑好。重新制胶吧。
        你用的是0.5×的TBE,那你配胶用的是什么?你一直没回答这个问题
        不会用水配的吧?
        我称的是0.3g的琼脂糖 放入30ml的0.5x的TBE 加热后制成1%的琼脂糖凝胶 谢谢您

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        师兄微信号:shixiongcoming

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