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        【求助】关于microRNA转染的MTT实验

        丁香园论坛

        1922
        大家好:
         我有几个关于实验的问题向您请教下!希望您给予指导!谢谢!
        1、简单介绍下我现在要做的实验,我们用的是micrRNA,序列如下:
        microRNA-15-a: 5'-UAGCAGCACAUAAUGGUUUGUG-3'
        microRNA-16-1: 5'-UAGCAGCACGUAAAUAUUGGCG-3’
        按照文献上说的,为了增强稳定性,我们合成了其互补链,做转染的时候用的是双链,转染到细胞质后,其会自动降解成单链,然后自主进核进行干扰,不知道这一个过程我们理解的是否正确,请您给予指教。
        2、关于细胞实验IC50
        我参考的文献,MTT做IC50用的RNA的浓度范围0.03-32μmol/L,给药方式就是24小时后给药一次,48小时后观察。 我想请教您如下问题:
        1.RNA的浓度要控制在哪个范围内合适?
        2.在这个范围内 设置几个点合适? 怎么设置?
        3.给药方式是什么比较合适,多次,还是一次?
        4.转染的我们RNA和材料的质量比大概在10:1左右,我们浓度控制是以RNA为标准,这样是否合适?
        1、基本上是这么说的,因为单练容易降解,双链比较稳定

        2、如果做细胞增殖的话,建议采用EdU方式更简便准确

        EdU细胞增殖检测方法
        你好 这个RNA的浓度怎么控制啊? 一般在什么范围内比较合适啊? 谢谢!

        本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴

        师兄微信号:shixiongcoming

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