fengbozhang 各位大侠：最近投了一个paper，是关于一个细胞因子激活STAT1通路，抑制ERK1/2通路而抑制肿瘤细胞生长的。老外的回修意见中，要求我做一个简单的小示意图，来说明作用信号传导通路。本人检索众多文献，发现无论STAT1还是ERK1/2，都很复杂，设计到很多的分子、染色体等，这个图该怎么简单说明一下呢？本人是搞临床的，弄这个东西实在很挠头啊！**高招！kern6549 审稿人的意思应该是让你做一个你 ...
hbglmn 本人进行某个基因启动子的DNA测序，发现一个突变点，但是不知道怎么查是否已经有人发现，恳请各位高手帮忙！非常感谢，因为本人刚从临床过来开始试验，很多东西不明白，请能够详细点说明！woxingwosu 呵呵，那你只能是看paper了，没有其他办法。不过基因的启动子突变研究，除非发现了这个突变真的具有很强的调节蛋白表达的效果，不然我觉得没有必要做下去的。默默默默默 同意楼上的建议！hbglmn 谢谢各位，我问了我们实验 ...
1179380155 请问能用ELISA（酶连接免疫吸附）法检测基因突变吗？感激不尽！woxingwosu ELISA-based Ki-ras gene mutation analyses in pancreatic and cholangiocarcinoma cells and tissues.AbstractDetection of Ki-ras mutations is one possible modality for diagnosis of human neoplasms, particul ...
cdduanshui 请教各位老师，myosin 2 和 nonmuscle myosin2有何区别？有没有人做这个的，能否提供一些资料，谢谢。cdduanshui 自己顶一下，希望各位老师帮忙zhujoker Myosin II (also known as conventional myosin) is the best-studied example of these properties.Myosin II contains two heavy chains, each about 2000 amino acids in l ...
rebeccagold 大家好。最近在做建一个高表达某G蛋白偶联受体的CHO细胞株，载体是pEGFP-C1。稳定筛选后，细胞的荧光表达很好。但奇怪的问题是，该受体定位出现了问题。原本该定位在膜的G蛋白偶联受体，现在基本上呈全细胞分布，而且核尤其亮。百思不得其解。请各位战友指点。附图为该细胞的Confocal图，没有染核。多谢大家啦！woxingwosu 呵呵，你的confocal照的效果很不好呀。不过确实可以看到其定位主要 ...
rebeccagold 大家好。最近在做建一个高表达某G蛋白偶联受体的CHO细胞株，载体是pEGFP-C1。稳定筛选后，细胞的荧光表达很好。但奇怪的问题是，该受体定位出现了问题。原本该定位在膜的G蛋白偶联受体，现在基本上呈全细胞分布，而且核尤其亮。百思不得其解。请各位战友指点。附图为该细胞的Confocal图，没有染核。多谢大家啦！kern6549 会不会是该受体带上了EGFP后无法定位到膜上了。rebeccagold 谢谢 ...
紫石榴 最近在研究心肌缺血对某microRNA的调控，有文献报道在原代细胞中随时间下调，我用的是H9c2心肌细胞系做的，想做个验证，顺便找最佳干预点。考虑经费问题，所以先用RT-PCR的方法做趋势，再上real time。我是提取总RNA，定量后（量和纯度都还好），用过茎环引物逆转录，再PCR电泳的，但做出的结果与设想趋势不符，且重复性很差，不知道哪里不对。麻烦高手指导下。版主zhujoker留言:RT-PCR这种半定量是不 ...
miaoduan 刚刚开始做信号通路，激活和阻断后测相关分子1、阻断剂配成需要浓度，加入六孔板，一小时后把所需激动剂贮存液直接加到六孔板中（感觉这样会浓度不均），24小时后检测2、阻断剂配成需要浓度，加入六孔板，一小时后去除，配好同时含有阻断剂和激动剂的工作液，加入各孔，24小时后检测3、阻断剂配成需要浓度，加入六孔板，一小时后去除，加入配好的所需浓度的激动剂工作液（不含阻断剂），24小时后检测不知说清楚了没，这三种方法 ...
cxm_7910 我是第一次作RNA干扰。我用1640培养基培养贴壁细胞，但RNA干扰试剂说明书上说最好用OPTI-MEMI低血清培养基来稀释siRNA和脂质体。请问可以用1640稀释吗？干扰后什么时候测mRNA和蛋白含量？谢谢！霍一刀hxs 最好用OPTI-MEM。瞬时转染，一般48小时之后检测。teagerxl 用1640无血清转染也可，刚开始做可以做一个时间梯度。mRNA和protein不同步。cxm_7910 谢谢！本文 ...
youyoubantang 想请教各位大侠，等位基因特异性表达分析：allele specific expression (ASE) assay 到底是什么，他的原理及操作步骤是怎样的，特别是原理，一直搞不明白还有就是他怎样验证cis-eQTL 的真实性shilei5794749 DOI 10.1016/j.cell.2010.09.049 看这篇文章！讲 long-noncoding RNAs 中 Jpx 调节 x chromosome inactivation 的。里面有 allele sp ...
har1224 我在genebank提交核苷酸序列遇到困难，请求园内老师帮助，自己花费很大精力，可是还是存在问题。 Do you know the correct annotation for your sequence(s)? If so,please resubmit your sequence(s) with relevant features such as:- coding regions (CDS features) including nucleotide spansand reading frame. Using t ...
月下独见 我最近打算提核蛋白做EMSA，我是自己配制的buffer，其中要加入100x Protease Inhibitor使buffer里含有1x Protease Inhibitor。这个100x Protease Inhibitor有没有买的？还是要自己配制。我查了一下资料Protease Inhibitor里含有Aprotinin Leupeptin Pepstatin PMSF，如果自己配Protease Inhibitor的话以上的试剂要 ...
xueer8847 请教：Real-time quantification of microRNAs by stem-loop RT-PCR.这篇文章的出处“Nucleic Acids Res, 2005, 33(20): e179.”中的e179代表什么，有谁知道这篇文章的起止页码的啊？谢谢！zhujoker e179代表其在那一期的序号，也就是说这篇文章在那一期为e179，原文附上xueer8847 多谢！：）dnazyme 其实这个杂志很特殊，e代表比期更小的一个单位，比 ...
sahalafeisha 我要做心血管方面的实验，想要构建microRNA过表达和反义核酸病毒载体，请问用腺病毒还是慢病毒，二者之间有什么区别。谢放各位高手！song333 most people use lentivirus,lenti is RNA virus, can integrate into host genome for long term assay; can infect into nondividing cells; high efficiency; easy to make virus.zhuj ...
clariceerica 1,请问用多少细胞就能做出qrt-pcr呢?小笨的研究对象是被化疗药打到粒缺的肿瘤病人,最少的目标细胞理论上只有300个细胞/ml血,也不知道磁珠能不能不能把它们分出来.2,同样的细胞做western行么,如果蛋白表达量是跟notch的差不多呢?3,请问这样的问题如何解决:总RNA做相对定量qrt-pcr,但是表达的细胞只占一定比例x%,怎样将结果校正到对应表达的这部分细胞?zhujoker 根 ...
jian_an1 园内有没有人知道 MiRNA表达谱的数据库.谢谢了zhujoker http://www.ebi.ac.uk/这个网站有。请仔细查找。artneer http://www.ebi.ac.uk/gxa/我最近刚好在做方面的工作希望能多多交流啊本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming
jyy6223405 kern6549 你想问什么？jyy6223405 怎样用流式细胞仪测定p-ERK1/2jyy6223405 具体的操作步骤kern6549 1、制备样品的单细胞悬液。2、4%多聚甲醛固定细胞。3、打孔剂处理细胞在细胞膜上打孔。4、标记荧光素偶联的抗p-ERK1/2抗体。5、流式上样分析。yaojun2006whu 可参考下面http://signal.dxy.cn/bbs/topic/18528145?tpg=1&age=0 ...
clariceerica 要看某个基因对应的DNA及mRNA上,它翻译出的蛋白的锌指区以及脱乙酰酶作用区各在那一段.B)谢谢啦谢谢啦~~woxingwosu http://www.genecards.org/看看有没有需要的clariceerica woxingwosu wrote:http://www.genecards.org/看看有没有需要的:O):O):O):O)打开了一封天书!!!clariceerica 我..我被打败了.吭哧看了那许多 ...
qingyuansw20 问人要了个siRNA质粒，但是没有GFP荧光，无法检测转染率。于是又要了个有GFP的质粒。这个GFP的质粒和siRNA质粒区别就是一个有荧光一个没荧光，一个没干扰序列一个有干扰序列。问题：两个质粒共转染细胞能检测转染率吗？只转让GFP的质粒能反映siRNA的转染率吗？kern6549 当然不能。mayle 可以做一下western本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的 ...
zhanghai123 大家好！我最近在做测定一种GPCR是否会引起细胞内钙离子浓度波动的实验。我是用共聚焦去测定，通过C3染料来检测。请问，在GPCR被配体激动后，假如我的GPCR是偶联Gaq的，一般多长时间就可以引起细胞内钙离子波动？我是直接在共聚焦上先用含钙PBS去测基线，之后洗掉PBS，直接加含药的PBS，然后开始测，5秒钟测一次。不知道这样时候正确。谢谢高手指教！kern6549 共聚焦检测很难实现定量，不适合 ...
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