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caoyu19841026 请问哪位做过大鼠活体内行RNA干扰（最好是针对血管内皮），具体步骤是？有没有好的公司可以推荐？谢谢。我的邮箱是caoyu1379934@sina.comfreecell 自己检索一下。此类文献汗牛充栋： http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/16725144caoyu19841026 谢谢指点！本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都 ...

cdduanshui 收缩环：在有丝分裂后期中轴附近形成的激动蛋白质纤维环，负责将子代细胞分开。我也看来一些关于胞质分裂和F-actin的一些文献，但由初涉这一方面，有些英文也看得不是很明白，心里有个疑问请教各位老师;由actin形成的收缩环是不是有一面附着于细胞膜上，另一面连着myosin，然后由myosin提供动力把胞膜往里拉?麻烦老师解答下，谢谢cdduanshui 顶一下，希望老师们帮助woxingwosu Co ...

manlyboy 各位战友，由于实验需要；急需人甲状腺癌细胞株：我查到的国内的细胞库里面有的就SW579（人甲状腺鳞癌细胞株）和TT细胞（人甲状腺髓样癌细胞），有点儿贵，还没买。不知道各位战友有没有养人甲状腺癌细胞株的？其他的人甲状腺癌细胞株也行，越多越好。因为实验中还要对细胞筛选，看哪株细胞能够符合下面实验的要求。如果有，可以联系我，最好是北京地区，方便快捷，非常感谢。无论是购买或是合作都可以，我们这里也有我们实验室主 ...

zuoliping 急切求助：因为有在文献查到PIK3/AKT与我要做的一个蛋白的表达有关，我想做这个通路的抑制剂与这个蛋白的表达的关系，看是否有时间和剂量的依赖性。但是抑制剂的说明说对这个剂量的范围很大，有查文献，在不同细胞中取的浓度组都不太一样，我想知道这些不同的浓度组是怎么确定的呢？要做MTT吗？希望大家不吝赐教！不甚感激！happytears 当然要做多次预实验了，做之前你需要大量阅读文献，看别人做过的你这种细 ...

zhanghai123 大家好！我最近在做一种GPCR的信号通路的分析目前能够确定的是我的这种受体在我所用的细胞系中是与Gαi相偶联，以前公认是与Gq相偶联，然后我用H89处理细胞，确定PKA 参与其中的调控。可是，我用环腺苷酸环化酶抑制剂SQ22536处理，却没有发现能够干预这条通路。目前公认的PKA是cAMP依赖的一种激酶，可是现在的结果却是矛盾的。我想问一下大家：是否存在不依赖cAMP的PKA的活化方式？谢谢！ ...

hp26695 转录因子只结合在DNA正链上，不结合在互补链上吗？谢谢我做启动子区多态性分析，发现T-C碱基转换后用软件预测发现在正链上无转录因子结合位点，对应的互补链上有woxingwosu 有这么一说吗？转录因子识别的位点应该可以是双链DNA吧?主要还是结合在有比较大的凹槽部位使得蛋白有空间进入结合区域就可以了。吴佰霖 与基因的转录方向一致但是记得双链是互补的，本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资 ...

两只小密封 不好意思，刚开始新的研究方向，涉及到要用基因敲除小鼠模型。有若干不懂的名词求助：除题目上的问题外，还有类似Egr2 f/f CD4 -/- (右上角的f和-分别代表什么意思呀？有时候还是+/-)。不知道我得问题大家看懂了没有。。。。。实在是汗。在线等答案。谢谢啦！！laddcat123 Egr2 f/f CD4 -/-:f代表是条件性沉默，利用Cre蛋白可以使其沉默-当然就是不表达woxingwosu 补充一下，cre-loxp是目前比较常用的基因敲除的办 ...

hddking 从某信号通路中间阻断，然后看一下阻断前后细胞蛋白质组学变化（打算用双向电泳研究），可行吗 ？freecell 你的研究目的是什么？hddking 看阻断前后蛋白质组学变化woxingwosu 应该是可行的吧hddking 信号从中间阻断的话，这个个信号发挥的功能是全被阻断了，还是部分阻断？吴佰霖 hddking wrote:信号从中间阻断的话，这个个信号发挥的功能是全被阻断了，还是部分阻断？对，特别是注意是否有旁路相通，否则实 ...

wyj2002 低氧诱导因子-1 是一种核转录因子，看到有些文献直接抽胞浆蛋白进行实验，请问有经验的朋友，是抽取胞浆蛋白还是核蛋白？先谢过了！xhjggl 可以用胞浆蛋白和核蛋白提取试剂盒，确定其在胞浆和核中的的分布情况，也可能是在胞浆中合成再进入细胞核中的，上海生工就有这样的试剂盒卖。细胞核蛋白/浆蛋白抽提试剂盒Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit产品说明：本试剂盒用于从哺乳动物组织 ...

suleipang 本人是研一的学生，还没有进过实验室。如果发现某肿瘤组织中某基因突变，那么使用什么样的方法能够证明某基因突变与肿瘤发生是否相关？希望前辈们不吝赐教，谢谢wales127 要知道你这个基因是否有过报道和肿瘤发生相关？ 如果是与肿瘤发生相关1，简单的就是检测下该基因下游的蛋白表达是否异常，这些下游蛋白如果有变化，需要在细胞水平证明其特异性2，再稍微复杂点的话，构建一个突变的转基因载体，利用组织特异性prom ...

douermm :)战友们好，我最近想做RNAi的实验，目的是使胃癌细胞的一个相关基因沉默，然后看干扰后的细胞耐药性的大小。想请教该用什么方法合成siRNA最合适？像我这样的实验是不是应该稳定转染呢？我现在对于合成途径很迷惑，化学合成一般的公司都是两千左右；体外转录书上说比较便宜，但是我不知道何得到模板及体外转录都需要具体做什么 还有相应的钱数；也考虑用质粒载体，那个质粒是怎么得到的呢，需要怎么做呢。是不是用不同的方法 ...

brucewu1986 我挑的阳性克隆（已检测），在加有抗生素的摇瓶中培养后，放在4度冰箱一天，枪头蘸取少量，6ml加相应抗生素管摇过夜，菌液浑浊，kit小提，测浓度约150ng/ul,但电泳检测看不到条带，酶切电泳也看不到，会不会是质粒丢失？但为啥可以在抗生素的培养基中生长？目的片段2.5kb，载体6k各位战友有没有遇到这种情况woxingwosu 我觉得一般情况下，质粒丢失的几率比较低。你是怎么检测阳性克隆的呢？如果是菌 ...

cdduanshui 请问各位老师：RhoGEF和RhoA有没有什么关系的？RhoGEF到底是个什么东西，也是小G蛋白的一种吗？只知道它叫RHO型鸟嘌呤核苷酸交换因子，刚刚接触这方面的东西，请老师点拨一下，不胜感激。cdduanshui 求教求教！cdduanshui 在顶一下，老师帮帮忙woxingwosu http://www.scitopics.com/Rho_GEFs.html本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的 ...

jiajiawonder 综述要用到这个 外显子剪接沉默子 可是不知道怎么能用简单明了的词解释清楚，求助高手~多谢~shilei5794749 Exonic splicing enhancer (ESE)An exonic splicing enhancer (ESE) is a DNA sequence motif consisting of 6 bases within an exon that directs, or enhances, accurate splicing of hetero-nuclear RNA (hnRNA) ...

waterbeijing 请问能从网上在线查到人或鼠的内源性siRNA表达谱吗，多谢版主zhujoker留言:人或鼠的内源性siRNA表达谱 是你自创的吧？是什么意思啊？问问题怎么也不表述清楚？waterbeijing sorry, I mean whether there is some database or any research detecting expression profiles of endogenous siRNAs (endogenous-small-inte ...

riset 看了一些文献，常用的荧光素酶质粒是pGL3，但是这个质粒图谱上，荧光素酶下游只有一个XbaI的酶切位点，不是多克隆位点，请问是如何解决克隆片段顺序问题的。谢谢。shilei5794749 用你序列的特异上游引物和RVprimer4，正向连进去菌P能扩出条带；反向连进去的扩不出条带。riset 多谢指教，另外再问下，UTR一般都比较长，不能全部克隆,一般克隆多长合适呢？还有就是PCR扩增UTR的时候是以基因组为模 ...

yixhchen 发现一个基因在某肿瘤细胞系中表达下调，下一步若做机制研究，可用哪些方法？新手，请各位高手多指点！yixhchen 没有人帮忙吗？提供一个方向就行了，不需太具体。woxingwosu 我来说说看：首先，确认是蛋白质水平的下调还是mRNA水平的下调，可以通过western blot和real time RT-PCR来初步确认一下。如果是mRNA水平上就出现下调，那么比较有可能的是这个基因是受这个癌肿瘤的某个信号通路或者是 ...

hupengfei5566 各位大虾，我最近在做K562自噬方面的研究，但是几次Wstern Blot结果跑下来我发现一个很奇怪的现象，就是我的未处理组的K562细胞的自噬水平波动很大。按理，正常水平下自噬水平应该是比较低的，但我做的结果中第一次结果比较好，后几次发现未处理组的细胞自噬水平也很高，就好像诱导了一样，LC3-Ⅱ的表达水平比LC3-Ⅰ还要高，我在附件中放了3次的实验结果，第一孔就是我的未处理组。请高手指教。不 ...

AlloY 用什么办法能预测出来呢？谢谢!shilei5794749 UCSC genome browser - genes and gene predication tracks - sno/miRNA trackDescriptionThis track displays positions of four different types of RNA in the human genome:precursor forms of microRNAs (pre-miRNAs)C/D box small nucleolar RNAs (C/D b ...

xxzjcg 大多数人认为原核细胞表达的蛋白没活性，但我最近看了篇文献原核细胞表达的蛋白有活性，并应用于炎症肠病的治疗，请教一下原核细胞表达的蛋白有活性吗lmnsmu 这个问题不能绝对的看待，需要一分为二。原核细胞表达的原核蛋白肯定有活性；对真核蛋白用原核体系进行表达，一些结构简单的、能够可溶表达的蛋白进行简单的尿素梯度等处理后就可以具备活性；而结构复杂、以包涵体形式表达的最初表达的蛋白没有活性，需要进行特殊的复性 ...