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bbdeng 有没有红细胞裂解液的配方？本人试了碧云天的红细胞裂解液，效果不大好，请高人指点！dnazyme http://baike.baidu.com/view/2601370.htmhttp://www.genialgenetics.com/products/reagents/erythrocyte-lysis-solution.htmlCOMPOSITION AND COMPONENT DATAPrepared or working solu ...

三水223 western blot 跑出三条带 请问这三条带分别应该怎么命名 请教达人 在线等……fanfine85 老兄，你的casepase是怎么跑出来的呀，我都做不出来seagate 太夸张了，泡成内参了gutao 跟标准marker比对啊，哪条带子符合caspase8的分子量，就是哪条了。用western 跑cas8是非常难的，我当初用santa crua的抗体跑了N遍都跑不出来，后来改用其他方法才勉强解决。楼主这么清晰的条带，是怎么跑出来的 ...

叮当儿 各位大侠，小妹要对HCE细胞的Toll样4受体做检测，但是细胞自身表达量太低，正常细胞提取RNA之后做逆转录都没有结果，而且我还要对其表达进行干扰，转染shRNA进去，结果就是做pcr时更没有结果了（内参很好），PCR反应条件如下：20ul volumcDNA loading 3ul10xtaq buffer 2uldNTPs(2.5/each) 2ulMg2+ 1.5ulprimer(F+R) 0.2ulTaq 0.2ulddH2O 11.1ul94℃ 3 ...

knightkidd 如题：手上如果有若干病历样本，如何从中筛查出未被报道过的基因突变位点？！最近在做SNP位点检测试剂，想了解前面的工作是如何进行的，如果哪位高人做过类似研究请指点！！yyyantopbt 这方面的实验我们做了很多，有需要可以交流，qq42020496。pingnana 您知道如何用基因克隆的方法鉴定双等位基因突变还是单等位基因突变吗？本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验 ...

tyssxlth 老板想检测某个基因在癌组织与癌旁组织中是否有碱基突变，请问一下大家应该怎么做？tyssxlth 顶起来！dnazyme 主要用PCR吧。如果谨慎些，可以从宏观到微观选用方法，例如，宏观上看看有没有易位、缺失之类的片段变化可以用核型分析之类的手段，最后再研究是否有点突变，例如chip、pcr等。还有很多新花招，FRET之类的，你查文献吧。yyyantopbt 最简单的方法就是PCR扩增出这个片段，然后测序观察，直 ...

sin_007 如题。一个基因在肿瘤细胞中表达下调，而对癌细胞用5‘Aza去甲基化处理后表达更下调。这该怎么解释？本来还怀疑该基因受表观遗传调控呢，但是结果相反，不知该怎么办了。特集思广益。sunquanqiu 可以再看看Histon啊sin_007 sunquanqiu wrote:可以再看看Histon啊恩，正在考虑要不要再做做乙酰化。但是目前还没有相关文献报道，所以还没放手做。本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的 ...

lmllml 这个是我今天跑的很失败的普通PCR结果。我是一个新手，所以···实在很失败cDNA做的PCR，反应体系是塔克拉的，那种非预混的酶体系胶是2％的可是结果，这些条带很奇怪···求教高手···万分感谢！yuzhiming 电泳液换新的。胶浓度不要那么高。0.8-1%即可！lzrzrl 是不是电压的问题knightkidd 应该是电压的问题，电压或者电流太高了把，我也出现过类似情况，跑慢点就好了！orforu 缓冲液的问题wanchua ...

myskite microRNA106-b~25的~25，是什么意思？myskite 自己顶顶，让更多的人看到。dnazyme 关于miRNA的命名，请参考： Victor Ambros, Bonnie Bartel, David P. Bartel, Christopher B. Burge, James C. Carrington, Xuemei Chen, Gideon Dreyfuss, Sean R. Eddy, Sam Griffiths-Jones, Mhairi Marshall, Marjori Matzke, Gary R ...

nysummerer 听说是science旗下的杂志，但感觉并没有nature系列那样知名。vparp 6.120nysummerer 谢谢您！本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

小米丫丫 请问哪位有知道北京有没有做膜片钳的公司或者实验室吗？就是不用自己去做的那种。请知道的一定回复我一下啊。万分感谢！！！mengyou999 爱思益普 ICE BIOSCIENCE梦飞扬674868990 北京爱思益普 ICE BIOSCIENCE，跟这个公司交流过，很不错的一家膜片钳公司。本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

mckf111 RT有人认为完全互补导致降解 不完全互补只是抑制 真的如此吗？zhujoker 来源出自哪儿？能够说清楚点吗？LoftyMan 什么东西，中医进军miRNA研究了？miRNA跟target本来就是不完全配对，又不是siRNAmckf111 zhujoker wrote:来源出自哪儿？能够说清楚点吗？有这个印象 但是出处确实想不到了dnazyme 楼主的这个概括太一般化，但是实际情况却更复杂。请参考文献： The complexities of ...

littleyan0418 我现在的任务是要构建人肺癌细胞的cDNA文库，但我不是这个方面科班出身，好多地方还不是很明白，想请教师兄师姐的经验，应该注意些什么。现在对总RNA的提取我有点找不出头绪。麻烦师兄师姐们可以给我分享些这方面的资料和网址吗？非常感谢！！neuronboy http://www.takara.com.cn/ 价格、试剂盒和说明书都有。呵呵littleyan0418 谢谢啊！！！本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用 ...

xinlongrui 哪位大侠知道腺相关病毒如何纯化呀？先透析然后冻干，再用PBS溶解行吗？谢谢了zhujoker 买个试剂盒不就搞定了吗？或者参考这篇文献：HSP70腺相关病毒的制备、表达及纯化xinlongrui 谢谢zhujoker.本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

myz68mrq 想做细胞的Notch调控，常用的Notch激活剂有哪些啊？zhujoker 有rhNF-κB参考下面2篇文献： Wnt和notch信号通路在肿瘤干细胞自我更新中的作用 ，myz68mrq 谢谢回复。现在有研究者使用Recombinant Rat Jagged 1 Fc Chimera，作为Notch的激活剂，不知在选择上有何不同？yuncen 忘记从哪看到 EDTA可以激活notch通路，当然非特异本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的 ...

jiangyanwen 如何根据靶基因预测microRNA? 除了现有的几个公认的网站之外，有没有更准确的方法啊？请教请教！zhujoker 如果有这么简单的话这方面的文章就不值，就如蛋白质相互作用，如果预测的60%准确，那么情况就简单多了dujiaoshou 我也想知道，谢谢。liuxinfanjian TargetScan很不错的。yjhua2110 这论坛上有个帖子专门介绍miRNA靶标数据库和软件的。连接如下：http://bi ...

ishemy1you 请教一下为什么28s和18s的比值能够代表RNA的质量呢？RIN值为什么比28s和18s的比值更好呢？biolinkphilic Because mammalian 28S and 18S rRNAs are approximately 5 kb and 2 kb in size, the theoretical 28S:18S ratio is approximately 2.7:1; but a 2:1 ratio has long been considered the benchmark for intact RNA. ...

tony3436 本人是个入门级新手，系里课题极少，没捞着练手，实验技术匮乏，特请高手指点：我想研究一蛋白的表达量及定位。目前考虑给蛋白加一GFP标签。但具体的蛋白序列，引物设计等步骤一无所知。希望高手赐教。不甚感激！kinguangjun 你好！你可以考虑用clontech的pEGFP-C1或者pEGFP-N1真核表达载体，把你所要做的蛋白和GFP融合在一起，然后转染细胞，就可以判断其蛋白的定位了，若要判断其表达量做We ...

yuandong “ Strikingly, about 80% of the cell’s DNA showed signs of being transcribed into RNA.”请问谁知道这句话中约80%细胞DNA有迹象显示能转录成RNA的文献出处吗？我在这篇文章附的参考文献中未找到：P. Kapranov, P et al., "Genome-wide transcription and the implications for genomic organization," Nature Rev. Genet. 8, 413 (2 ...

cnstr14 有个问题请教一下前辈们，当质粒与感受态菌混在一起做转化时，同一个菌是否有可能吸收进不同的质粒载体，比如同时吸收了含有不同目的基因的载体进入细胞？若有可能，那为什么挑去单克隆去测序，往往是单一目的片段的。若不可能，请告诉我为什么。谢谢zjubell cnstr14 wrote:有个问题请教一下前辈们，当质粒与感受态菌混在一起做转化时，同一个菌是否有可能吸收进不同的质粒载体，比如同时吸收了含有不同目的基因的载 ...

云忆香香 最近分配到一个课题，但是刚开始学习，不知怎么做，请各位给点提示，谢谢！课题大致意思：已知一个质粒的目的基因序列，却不知道质粒序列，导师要求测出质粒的序列，有提示用染色体步移的方法。Ps：1，这个质粒很大，估计又20-30kb；2，目前市场上有测未知序列的试剂盒，但是最多测到3kb，我不知道用什么办法使其连续测下去；3，我的酶切位点都不知道；谢谢各位支持~zjubell 这么小的基因组，用高通量测序，很容易搞定的。20K ...