【求助】VEGF和GFP融合蛋白
丁香园论坛
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请教一下各位老师，在构建过表达载体的时候，VEGF和GFP是不是不可以做成融合蛋白，但是如果用不同的启动子的话，很容易丢失荧光，有没有什么解决方法。
可以做成融合蛋白的，即使是使用不同的启动子的话荧光也不那么容易丢失的，大不了你将荧光的启动子换成强的如CMV，EF1a之类。
或者你可以用CMV-VEGF-IRES-GFP来做也可以，这样用一个启动子CMV同时表达两个蛋白，而不是融合蛋白。
VEGF应该加在GFP的N端还是C端？
VEGF加在GFP的N端或C端均可以，而且有一些载体如pEGFP-N1或pEGFP-C1在N端或C端已经有GFP的序列，只需将你的目的基因序列插入到MCS区即可融合表达。
多谢大家！
GFP应该位于VEGF的C端
N端会干扰其分泌信号 影响其分泌
GFP很大 很可能影响VEGF的分泌
如果只是要筛带荧光的细胞 不需要标记VEGF 建议用pIRES2-EGFP非融合载体
要是需要标记的话
可以加小分子tag 比如flag
实在需要荧光标记VEGF的话
把GFP加在C端
N端会干扰其分泌信号 影响其分泌
GFP很大 很可能影响VEGF的分泌
如果只是要筛带荧光的细胞 不需要标记VEGF 建议用pIRES2-EGFP非融合载体
要是需要标记的话
可以加小分子tag 比如flag
实在需要荧光标记VEGF的话
把GFP加在C端
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